Báo cáo khoa học: Purification, microsequencing and cloning of spinach ATP-dependent phosphofructokinase link sequence and function for the plant enzyme

Purification, Microsequencing and Cloning of Spinach ATP-Dependent Phosphofructokinase Link Sequence and Function for the Plant Enzyme

Tên đề tài: Purification, Microsequencing and Cloning of Spinach ATP-Dependent Phosphofructokinase Link Sequence and Function for the Plant Enzyme

Tác giả: Christian Winkler, Britta Delvos, William Martin, and Katrin Henze

Lĩnh vực: Institute of Botany III, University of Düsseldorf, Germany

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày quy trình tinh sạch, vi tuần tự hóa và nhân bản gen của enzyme ATP-dependent phosphofructokinase (ATP-PFK) từ cây cải bó xôi (Spinacia oleracea). Enzyme đã được tinh sạch đến độ tinh khiết điện di cao, cho thấy hoạt tính đặc hiệu cao và có ái lực với ATP. Các peptide từ enzyme đã được xác định trình tự và một cDNA tương ứng đã được nhân bản. Phân tích trình tự cho thấy enzyme này thuộc về một họ lớn các enzyme ATP-PFK thực vật, và các enzyme được chú giải là PP-dependent phosphofructokinases dựa trên sự tương đồng trình tự có thể bị chú giải sai về đồng yếu tố. Nghiên cứu cũng thảo luận về các đặc tính của enzyme tinh sạch, bao gồm khối lượng phân tử, hoạt tính và khả năng ức chế bởi phosphate, gợi ý rằng đây là dạng enzyme ở lục lạp.

Mục lục chi tiết:

• Purification, microsequencing and cloning of spinach ATP-dependent phosphofructokinase link sequence and function for the plant enzyme
• Keywords
• Correspondence
• Database
• Phosphofructokinase (PFK) catalyzes the phosphorylation of D-fructose 6-phosphate to D-fructose 1,6-bisphosphate.
• Abbreviations
• Plant ATP-dependent phosphofructokinase
• Purification of spinach ATP-PFK
• Table 1. Purification of spinach ATP-PFK.
• Fig. 1. Silver-stained 12% SDS/PAGE of spinach PFK from different purification steps.
• Results and Discussion
• Purification and microsequencing of spinach PFK
• Fig. 2. Deduced protein sequencees of PFK from Spi. oleracea cDNA clones.
• Properties of spinach ATP-PFK
• Fig. 3. Elution profile for SoPFK1 after gel filtration chromatography on a Superdex 200 HR 10/30 column.
• Fig. 4. Spinach PFK activity assayed in the absence (black bar) or presence (gray bar) of 25 mm phosphate.
• Subunit composition
• Higher plant ATP-PFK sequence comparisons
• Fig. 5. Sequence similarity among PFK homologs.
• Materials and methods
• Strains and media
• Enzyme assay
• Purification of spinach ATP-PFK
• Molecular mass determination
• In-gel tryptic digestion, peptide sequencing and protein identification
• Cloning of PFK genes
• Phylogenetic analysis
• Acknowledgements
• References
• Supplementary material