Báo cáo khoa học: Folding and turnover of human iron regulatory protein 1 depend on its subcellular localization

Folding and turnover of human iron regulatory protein 1 depend on its subcellular localization

Tác giả: Alain Martelli, Bénédicte Salin, Camille Dycke, Mathilde Louwagie, Jean-Pierre Andrieu, Pierre Richaud, and Jean-Marc Moulis

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá cách protein điều hòa sắt 1 (IRP1) của con người hoạt động và biến đổi khi nó được định vị trong các bào quan khác nhau của tế bào nấm men. Mặc dù IRP1 của con người thể hiện hoạt tính aconitase trong ty thể nấm men, nó lại hình thành các hạt dày đặc, được gọi là thể vùi. Sự hình thành các thể vùi này không xảy ra trong tế bào chất và dường như phụ thuộc vào sự tương tác với protein KGD1p. Điều này cho thấy việc gấp khúc đúng cách của IRP1 hai chức năng phụ thuộc vào môi trường tế bào, khác với các thành viên khác trong họ aconitase.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Human IRP1 displays aconitase activity in yeast mitochondria
• Immunocytochemical and ultrastructural analysis of mitochondria-targeted IRP1
• Purification of mitochondrial inclusion bodies on sucrose gradient
• Identification of the aggregated proteins using MS
• Role of KGD1p in the formation of mitochondrial aggregates containing hIRP1
• Elemental analysis of yeast mitochondria
• Discussion
• Experimental procedures
• Strains and media
• Freezing and freeze substitution for ultrastructural studies
• Immunogold electron microscopy
• Purification of mitochondrial inclusion bodies on sucrose gradient
• Immunoblotting and protein transfer for amino acid sequencing
• N-Terminal amino acid sequencing
• Measurements of metal concentrations
• In-gel digestion of proteins, peptide extraction and MS analysis
• Acknowledgements
• References