Báo cáo khoa học: Effect of mutations in the b5–b7 loop on the structure and properties of human small heat shock protein HSP22 (HspB8, H11)

Effect of Mutations in the β5–β7 Loop on the Structure and Properties of Human Small Heat Shock Protein HSP22 (HspB8, H11)

Tác giả: Alexei S. Kasakov, Olesya V. Bukach, Alim S. Seit-Nebi, Steven B. Marston, Nikolai B. Gusev

Lĩnh vực: Hóa sinh, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích ảnh hưởng của các đột biến tại vòng lặp β5–β7 và các gốc axit amin bảo tồn trong chuỗi β7 của protein sốc nhiệt nhỏ ở người HSP22 (HspB8, H11). Các nhà nghiên cứu đã thay thế hai gốc axit amin bảo tồn là Lys137 và Lys141 bằng Glutamate để tạo ra các dạng đột biến K137E và K137,141E. Kết quả cho thấy các đột biến này làm giảm huỳnh quang Trp nội tại và làm tăng cấu trúc không có trật tự của HSP22, đồng thời tăng khả năng bị phân giải bởi trypsin. Các đột biến cũng làm giảm xác suất phân ly của các oligomer nhỏ của HSP22. Đặc biệt, dạng đột biến K137E làm tăng khả năng liên kết chéo của HSP22. Hoạt tính chaperone-like của HSP22 dạng đột biến thấp hơn so với dạng hoang dã, với dạng K137E thể hiện hoạt tính chaperone-like thấp hơn đáng kể.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Keywords
• Correspondence
• Results
• Peculiarities of HSP22 structure
• Oligomeric structure of HSP22 and its mutants
• Effect of K137E and K137,141E mutations on the structure of HSP22
• Chaperone-like activity of wild-type HSP22 and its mutants
• Discussion
• Experimental procedures
• Cloning, expression and purification of HSP22 and its mutants
• Size-exclusion chromatography
• Electrophoretic methods
• Chemical crosslinking
• Fluorescence spectroscopy
• CD spectroscopy
• Limited proteolysis
• Acknowledgements
• References