Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 14 trang
Dung lượng: 516 KB

Giới thiệu nội dung

The Isolation and Characterization of Temperature-Dependent Ricin A Chain Molecules in Saccharomyces cerevisiae

Tác giả: Stuart C. H. Allen, Katherine A. H. Moore, Catherine J. Marsden, Vilmos Fülöp, Kevin G. Moffat, J. Michael Lord, Graham Ladds, and Lynne M. Roberts

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Di truyền học vi sinh vật

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và đặc tính hóa các phân tử ricin A chain (RTA) phụ thuộc vào nhiệt độ trong nấm men Saccharomyces cerevisiae. Ricin là một độc tố thực vật heterodimeric có khả năng gây độc mạnh cho tế bào động vật có vú, hoạt động bằng cách làm mất purin ribosome. Bằng cách sử dụng S. cerevisiae, các nhà nghiên cứu đã xác định được hai chủng đột biến RTA phụ thuộc vào nhiệt độ với các kiểu hình trái ngược nhau: một chủng cho phép tế bào phát triển ở nhiệt độ cao hơn nhưng không phát triển ở nhiệt độ thấp hơn, và chủng còn lại có kiểu hình ngược lại. Các đột biến này được cho là cần thiết cho sự phát triển phụ thuộc vào nhiệt độ của tế bào. Nghiên cứu đã điều tra chi tiết hơn về quá trình N-glycosyl hóa, độ ổn định, hoạt tính xúc tác và cấu trúc ba chiều của các phân tử RTA đột biến này, nhằm mục đích hiểu rõ hơn về cơ chế hoạt động của độc tố và ứng dụng chúng trong các sàng lọc di truyền để xác định các yếu tố của tế bào nấm men cần thiết cho quá trình vận chuyển ngược RTA vào tế bào chất.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Keywords
  • Correspondence
  • Abbreviations
  • Results
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Yeast strain, manipulations and growth media
  • PCR mutagenesis
  • Yeast plating
  • Pulse-chase analyses
  • Endoglycosidase H treatment
  • Plasmid DNA extraction from yeast
  • Expression and purification of recombinant RTAE177D
  • Crystallization, X-ray data collection and refinement of RTAE177D
  • RNA extraction
  • In vitro depurination of salt-washed ribosomes
  • Northern blot analysis of depurinated rRNA
  • Acknowledgements
  • References