Báo cáo khoa học: Transglutaminase from Streptomyces mobaraensis is activated by an endogenous metalloprotease

Transglutaminase from Streptomyces mobaraensis is activated by an endogenous metalloprotease

Tác giả: J. Zotzel, P. Keller and H.-L. Fuchsbauer

Lĩnh vực: Fachbereich Chemie- und Biotechnologie, Fachhochschule Darmstadt, Germany

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định và đặc tính hóa một metalloprotease nội sinh (TAMEP) từ Streptomyces mobaraensis có khả năng hoạt hóa transglutaminase (TGase). TGase là một enzyme đa chức năng có vai trò quan trọng trong nhiều quá trình sinh học. Trong S. mobaraensis, TGase được tiết ra dưới dạng tiền chất không hoạt động và cần được xử lý bởi một protease để đạt được hoạt tính đầy đủ. Các thí nghiệm đã chỉ ra rằng TAMEP đóng vai trò chính trong quá trình này, cắt một peptide N-terminal khỏi tiền chất TGase. Nghiên cứu cũng xác định rằng hoạt động của TAMEP được điều chỉnh bởi một polypeptide ức chế 14 kDa (P14), thuộc họ chất ức chế protease Streptomyces subtilisin (SSI). Sự ức chế TAMEP bởi P14 cho thấy vai trò quan trọng của P14 trong việc kiểm soát hoạt động TGase trong S. mobaraensis, có thể liên quan đến sự biệt hóa của vi khuẩn.

Mục lục chi tiết:

• Transglutaminase from Streptomyces mobaraensis is activated by an endogenous metalloprotease
• Tác giả: J. Zotzel, P. Keller and H.-L. Fuchsbauer
• Lĩnh vực: Fachbereich Chemie- und Biotechnologie, Fachhochschule Darmstadt, Germany
• Abstract
• Keywords
• Introduction
• Materials and methods
• Preparation of protease extracts
• Purification of TAMEP
• N-terminal sequencing
• Purification of P14 from S. mobaraensis
• Determination of the TAMEP cleavage site
• Protease assays
• Inhibition of TAMEP by P14 from S. mobaraensis or other inhibitors
• Preparation of polyclonal antibodies against P14
• Other analytical procedures
• Results
• Proteases secreted by S. mobaraensis on a nutrition-deficient medium
• Purification of the TGase-activating protease
• Identification of the cleavage site and the protease family
• Properties of TAMEP
• Purification of the TAMEP inhibitor, P14
• Regulation of TAMEP and TGase by P14
• Discussion
• Acknowledgements
• References