Báo cáo khoa học: Identification of calreticulin as a ligand of GABARAP by phage display screening of a peptide library

Identification of calreticulin as a ligand of GABARAP by phage display screening of a peptide library

Tác giả: Jeannine Mohrlüder, Thomas Stangler, Yvonne Hoffmann, Katja Wiesehan, Anja Mataruga, Dieter Willbold

Lĩnh vực: Sinh học Vật lý, Sinh học Phân tử, Sinh học Tế bào

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc xác định calreticulin như một phối tử có ái lực cao với GABARAP. GABARAP, một protein liên quan đến thụ thể GABAA, đóng vai trò trong quá trình vận chuyển nội bào của các thụ thể GABAA. Thông qua sàng lọc thư viện peptide bằng phương pháp phage display, các peptide liên kết đặc hiệu với GABARAP đã được xác định. Phân tích trình tự amino acid của các peptide này đã dẫn đến việc nhận dạng calreticulin như một protein tiềm năng liên kết với GABARAP. Sự liên kết giữa GABARAP và calreticulin đã được xác nhận bằng các thí nghiệm pull-down và nghiên cứu sự cộng định vị trong tế bào N2a. Kết quả cho thấy GABARAP và calreticulin tương tác với hằng số phân ly là 64 nm và thời gian tồn tại phức hợp trung bình là 20 phút, cho thấy đây là một tương tác mạnh mẽ.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Introduction
• Results
• In vitro selection of GABARAP peptide ligands
• Phage display selected peptide N1 binds to GABARAP
• Identification of CRT as a potential GABARAP ligand
• Recombinant GABARAP binds endogenous CRT
• GABARAP and CRT interact with high affinity
• N1 peptide competes with CRT for GABARAP binding
• Discussion
• Experimental procedures
• Phage display screening
• Motif extraction and database search
• Peptides and proteins
• Immunocytochemistry
• Affinity purification ‘pull-down’ assays
• Fluorescence titration
• SPR
• NMR
• Acknowledgements
• References