Báo cáo khoa học: Effect of ionic strength and oxidation on the P-loop conformation of the protein tyrosine phosphatase-like phytase, PhyAsr

Effect of Ionic Strength and Oxidation on the P-loop Conformation of the Protein Tyrosine Phosphatase-like Phytase, PhyAsr

Tác giả: Robert J. Gruninger, L. Brent Selinger, Steven C. Mosimann

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá ảnh hưởng của cường độ ion và quá trình oxy hóa lên cấu trúc của protein tyrosine phosphatase (PTP)-like phytase, PhyAsr, một enzyme thủy phân myo-inositol-1,2,3,4,5,6-hexakisphosphate. Các nhà khoa học đã phân tích sự thay đổi cấu trúc của P-loop (vòng liên kết phosphate) trong các điều kiện khác nhau, bao gồm cả khi có và không có ligand, cũng như khi cysteine xúc tác bị oxy hóa. Nghiên cứu cũng đánh giá hiệu quả xúc tác của PhyAsr dưới các điều kiện cường độ ion khác nhau và xác định rằng sự thay đổi cấu trúc P-loop không liên quan trực tiếp đến cường độ ion mà là kết quả của quá trình oxy hóa bất thuận nghịch của cysteine xúc tác thành acid sulfonic.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Ionic strength affects the catalytic efficiency of PhyAsr
• Structure of PhyAsr under low and high ionic strength conditions
• Structure of PhyAsr upon oxidation of the catalytic cysteine
• Comparison of contacts to the P-loop in the unoxidized and oxidized conformations
• Oxidation of cysteine affects the conformation of several residues
• Structural consequences of oxidation in the PTP superfamily
• Sensitivity and reversibility of PhyAsr oxidation
• Discussion
• Effect of ionic strength on PhyAsr catalysis and P-loop structure
• Sensitivity of PhyAsr to oxidation
• Oxidation of PTPs and the role of P-loop flexibility
• Experimental procedures
• Purification and crystallization
• Data collection and structure determination
• Kinetic assays
• Acknowledgements
• References
• Supplementary material