New Members Of The Brachyurins Family In Lobster

New Members of the Brachyurins Family in Lobster Include a Trypsin-like Enzyme with Amino Acid Substitutions in the Substrate-Binding Pocket

Tác giả: Erick Perera, Tirso Pons, Damir Hernandez, Francisco J. Moyano, Gonzalo Martínez-Rodríguez, Juan M. Mancera

Lĩnh vực: Crustacean serine proteases (Brachyurins, EC 3.4.21.32)

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc khảo sát sự đa dạng của các enzyme trypsin trong tuyến tiêu hóa của tôm hùm gai (Panulirus argus). Các nhà nghiên cứu đã xác định được một số enzyme trypsin-like mới, bao gồm cả một enzyme có sự thay thế các axit amin trong vùng liên kết với cơ chất. Các phân tích về trình tự nucleotide và mô hình hóa cấu trúc ba chiều đã chỉ ra rằng có ít nhất ba họ gen mã hóa cho các enzyme trypsin ở tôm hùm. Một biến thể enzyme đặc biệt có những thay đổi trong vùng liên kết cơ chất, bao gồm cả sự thay thế các gốc Glycine bằng Leucine và Proline, có thể ảnh hưởng đến khả năng tương tác của enzyme với các cơ chất có gốc axit amin cồng kềnh, làm cho túi liên kết trở nên kỵ nước hơn. Enzyme này được biểu hiện với số lượng lớn trong tôm hùm, cho thấy vai trò sinh lý quan trọng của nó. Các phát hiện này gợi ý rằng phạm vi đặc hiệu của các enzyme trong họ brachyurins rộng hơn so với hiểu biết hiện tại, mở ra hướng nghiên cứu sâu hơn về mối quan hệ cấu trúc-chức năng và sự tiến hóa của các enzyme này.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results and Discussion
• Characterization of cDNAs and trypsin-like deduced protein sequences
• Three-dimensional structure by comparative modelling
• Phylogenetic analysis
• Tissue-specific expression pattern of trypsin variants
• Materials and methods
• Animals and total RNA extraction
• Cloning and sequencing
• Obtaining 5′ and 3′ ends by Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE)
• Sequence analysis
• Comparative 3D modelling
• Acknowledgements
• References