Báo cáo khoa học: Identification in the yeast Pichia stipitis of the first L-rhamnose-1-dehydrogenase gene

Identification in the yeast Pichia stipitis of the first L-rhamnose-1-dehydrogenase gene

Tác giả: Outi M. Koivistoinen, Satu Hilditch, Sanni P. Voutilainen, Harry Boer, Merja Penttilä, and Peter Richard

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Di truyền học vi sinh vật

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định gen mã hóa cho enzyme L-rhamnose-1-dehydrogenase trong nấm men Pichia stipitis. Enzyme này là bước đầu tiên trong con đường chuyển hóa L-rhamnose không có các sản phẩm trung gian được phosphoryl hóa, một con đường đã được quan sát thấy ở các vi sinh vật eukaryotic nhưng các gen mã hóa cho enzyme lại chưa được xác định. Nghiên cứu đã sử dụng kỹ thuật khối phổ MALDI-TOF MS để xác định trình tự peptide của enzyme đã được tinh sạch, từ đó nhận dạng được gen RHAI. Gen này mã hóa cho một protein thuộc họ alcohol dehydrogenase bậc thấp. Protein được biểu hiện thành công trong Saccharomyces cerevisiae và cho thấy hoạt tính xúc tác với L-rhamnose, L-lyxose và L-mannose, với ái lực cao nhất đối với L-rhamnose. Phân tích Northern blot cho thấy gen RHAI được cảm ứng bởi L-rhamnose.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Results
• Northern analysis
• Discussion
• Experimental procedures
• Enzyme assays
• Enzyme purification
• In-gel digestion and MALDI-TOF MS
• Cloning of the ORF, site-directed mutagenesis and heterologous expression
• Northern analysis
• Acknowledgements
• References