Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nhân dòng, biểu hiện, tinh sạch và xác định hoạt tính của protein Pwo DNA polymerase tái tổ hợp ở E. coli

Nhân Dòng, Biểu Hiện, Tinh Sạch Và Xác Định Hoạt Tính Của Protein Pwo DNA Polymerase Tái Tổ Hợp Ở E. Coli

Tác giả: Nguyễn Thị Thu Huyền

Lĩnh vực: Di truyền học

Nội dung tài liệu:

Luận văn này tập trung vào việc nghiên cứu enzyme Pwo DNA polymerase, một loại enzyme bền nhiệt có vai trò quan trọng trong nhiều ứng dụng sinh học phân tử và y học. Nghiên cứu nhằm mục đích xây dựng quy trình sản xuất enzyme Pwo DNA polymerase chất lượng cao tại Việt Nam, giảm giá thành và thời gian cung cấp so với việc nhập khẩu. Cụ thể, đề tài tập trung vào việc nhân dòng, biểu hiện, tinh sạch và xác định hoạt tính của protein Pwo DNA polymerase tái tổ hợp trong E. coli. Nghiên cứu này góp phần đánh giá chính xác hiệu quả sử dụng enzyme Pwo-pol ở quy mô phòng thí nghiệm, định hướng cải tiến hiệu quả enzyme trong ứng dụng tại Việt Nam.

Mục lục chi tiết:

• Lời cảm ơn
• Mục lục
• Danh mục hình
• Danh mục bảng
• Danh mục chữ viết tắt
• Mở đầu
• Chương 1 – Tổng quan tài liệu
• 1.1. Khái quát DNA polymerase
• 1.1.1. Phân loại DNA polymerase
• 1.1.2. Cấu trúc và chức năng của DNA polymerase
• 1.1.3. Quá trình sao chép DNA
• 1.2. Ứng dụng của DNA polymerase
• 1.2.1. Kỹ thuật giải trình tự
• 1.2.2. Kỹ thuật PCR
• 1.3. Tình hình nghiên cứu Pwo DNA polymerase
• 1.3.1. Phân loại nguồn gốc
• 1.3.2. Nghiên cứu biểu hiện Pwo DNA polymerase tái tổ hợp
• 1.3.3. Các đặc tính quan trọng của DNA polymerase dùng cho PCR
• 1.4. Công nghệ protein tái tổ hợp
• 1.4.1. Tổng hợp gen, tối ưu mã codon
• Chương 2 – Vật liệu và phương pháp
• 2.1. Vật liệu nghiên cứu
• 2.1.1. Nguyên vật liệu
• 2.1.2. Dụng cụ và thiết bị
• 2.1.3. Hóa chất và môi trường
• 2.2. Phương pháp nghiên cứu
• 2.2.1. Thiết kế gen đích mã hóa Pwo DNA polymerase
• 2.2.2. Nhân dòng, tạo vector mang gen mã hóa Pwo DNA polymerase
• 2.2.3. Biểu hiện protein Pwo DNA polymerase ở E. coli
• 2.2.4. Tinh sạch protein Pwo DNA polymerase
• 2.2.5. Xác định hoạt tính của protein Pwo DNA polymerase
• Chương 3 – Kết quả và thảo luận
• 3.1. Phân tích gen mã hóa Pwo DNA polymerase tái tổ hợp
• 3.2. Nhân dòng vector mang gen mã hóa Pwo DNA polymerase
• 3.2.1. Tạo vector tái tổ hợp pEtM-Pwo
• 3.2.2. Biến nạp vector tái tổ hợp pEtM-Pwo vào vi khuẩn E. coli BL21 (DE3)
• 3.2.3. Tách plasmid, kiểm tra trình tự
• 3.3. Biểu hiện protein Pwo DNA polymerase ở vi khuẩn E. coli
• 3.4. Tinh sạch protein tái tổ hợp Pwo DNA polymerase
• 3.4.1. Phương pháp tinh sạch sắc ký ái lực nickel
• 3.4.2. Phương pháp tinh sạch kết tủa bằng muối ammonium sulfate
• 3.5. Xác định hoạt tính của protein tái tổ hợp Pwo DNA polymerase
• 3.5.1. Tối ưu thành phần buffer PCR
• 3.5.2. Hoạt tính sao chép
• 3.5.3. Khả năng chịu nhiệt độ cao
• 3.5.4. Hoạt tính khi có mặt chất ức chế
• Chương 4 – Kết luận và kiến nghị
• Tài liệu tham khảo