Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 92 trang
Dung lượng: 25 MB

Giới thiệu nội dung

Thiết Kế Cấu Trúc Chỉnh Sửa Promoter Gen OsSWEET Liên Quan Đến Cơ Chế Xâm Nhiễm Của Vi Khuẩn Gây Bệnh Bạc Lá Trên Giống Lúa TBR225

Tác giả: Phùng Thị Thu Hương

Lĩnh vực: Sinh học Thực nghiệm

Nội dung tài liệu:

Luận văn Thạc sĩ Khoa học này tập trung vào việc nghiên cứu thiết kế cấu trúc chỉnh sửa promoter gen OsSWEET. Nghiên cứu này nhằm mục đích cải thiện khả năng kháng bệnh bạc lá trên giống lúa TBR225, một giống lúa chủ lực tại Việt Nam nhưng lại mẫn cảm với bệnh này. Bệnh bạc lá, do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) gây ra, là nguyên nhân chính gây thiệt hại đáng kể cho sản lượng lúa gạo toàn cầu và đặc biệt nghiêm trọng tại Việt Nam. Cơ chế gây bệnh của Xoo có liên quan mật thiết đến các protein TAL, có khả năng kích hoạt phiên mã các gen vận chuyển đường thuộc họ OsSWEET. Do đó, việc chỉnh sửa promoter của OsSWEET được kỳ vọng sẽ tạo ra giống lúa có khả năng kháng bệnh bạc lá hiệu quả hơn. Nghiên cứu này ứng dụng công nghệ chỉnh sửa hệ gen CRISPR/Cas9 để thực hiện mục tiêu trên, góp phần nâng cao năng suất, chất lượng và tính bền vững của ngành sản xuất lúa gạo.

Mục lục chi tiết:

  • MỞ ĐẦU
  • Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
    • 1.1. BỆNH BẠC LÁ Ở LÚA
      • 1.1.1. Giới thiệu chung về bệnh bạc lá lúa
      • 1.1.2. Ảnh hưởng của bệnh bạc lá tới sản xuất lúa gạo
      • 1.1.3. Biện pháp phòng trừ bệnh bạc lá lúa
    • 1.2. VI KHUẨN XANTHOMONAS ORYZAE PV. ORYZAE
      • 1.2.1. Phân loại vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae
      • 1.2.2. Đặc điểm sinh học của vi khuẩn Xoo
      • 1.2.3. Cơ chế gây bệnh trên cây lúa của vi khuẩn Xoo
        • 1.2.3.1. Con đường xâm nhiễm và lây truyền của vi khuẩn Xoo
        • 1.2.3.2. Cơ chế gây bệnh của vi khuẩn Xoo
    • 1.3. NGHIÊN CỨU CHỌN TẠO GIỐNG LÚA KHÁNG BỆNH BẠC LÁ
      • 1.3.1. Nghiên cứu chọn tạo giống lúa kháng bệnh bạc lá dựa trên gen kháng
        • 1.3.1.1. Gen kháng bệnh bạc lá lúa
    • 1.4. HỆ THỐNG CHỈNH SỬA GEN CRISPR/Cas9
      • 1.4.1. Giới thiệu về công nghệ chỉnh sửa hệ gen
      • 1.4.2. Hệ thống chỉnh sửa gen CRISPR/Cas9
      • 1.4.3. Ứng dụng hệ thống CRISPR/Cas9 trong chỉnh sửa gen thực vật
    • 1.5. CHUYỂN GEN Ở THỰC VẬT VÀ HỆ VECTOR CHUYỂN GEN
      • 1.5.1. Phương pháp chuyển gen ở thực vật thông qua A. tumefaciens
      • 1.5.2. Hệ vector sử dụng trong nghiên cứu chuyển gen thực vật
      • 1.5.3. Vector chỉnh sửa gen trong tế bào thực vật
  • Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
    • 2.1. VẬT LIỆU
      • 2.1.1. Mẫu thực vật
      • 2.1.2. Chủng vi sinh vật
      • 2.1.3. Vector và oligonucleotide
      • 2.1.4. Hóa chất
      • 2.1.5. Thiết bị
    • 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
      • 2.2.1. Chuẩn bị mẫu thực vật
      • 2.2.2. Tách chiết, định tính, định lượng DNA
      • 2.2.3. Đánh giá độc tính của vi khuẩn Xoo trên giống lúa TBR225
      • 2.2.4. Nhân dòng promoter SW14–TBR vào vector pGEM-T
      • 2.2.5. Thiết kế cấu trúc chỉnh sửa promoter SW14–TBR
      • 2.2.6. Biến nạp vector pCas9/Tal5–TalC vào tế bào A. tumefaciens
      • 2.2.7. Xác định kiểu gen của cây chuyển gen bằng PCR
  • Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU & THẢO LUẬN
    • 3.1. ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN XOO
      • 3.1.1. Đánh giá độc tính của vi khuẩn Xoo trên giống lúa TBR225
      • 3.1.2. Vai trò của OsSWEET14 đối với quá trình lây nhiễm của Xoo
    • 3.2. NHÂN DÒNG VÀ GIẢI TRÌNH TỰ PROMOTER SW14–TBR
      • 3.2.1. Nhân bản promoter SW14–TBR
      • 3.2.2. Nhân dòng promoter SW14–TBR
      • 3.2.3. Giải trình tự promoter SW14–TBR
    • 3.3. THIẾT KẾ CẤU TRÚC CHỈNH SỬA PROMOTER SW14–TBR
      • 3.3.1. Thiết kế trình tự crRNA chỉnh sửa promoter SW14–TBR
      • 3.3.2. Thiết kế cấu trúc biểu hiện sgRNA chỉnh sửa SW14–TBR
      • 3.3.3. Thiết kế vector chuyển gen mang cấu trúc chỉnh sửa SW14–TBR
    • 3.4. NGHIÊN CỨU CHUYỂN CẤU TRÚC T-DNA VÀO LÚA TBR225
      • 3.4.1. Biến nạp vector biểu hiện vào A. tumefaciens EHA105
      • 3.4.2. Chuyển cấu trúc chỉnh sửa SW14–TBR vào giống lúa TBR225
  • KẾT LUẬN
  • KIẾN NGHỊ
  • TÀI LIỆU THAM KHẢO