Báo cáo Y học: The regulatory subunit of a cGMP-regulated protein kinase A of Trypanosoma brucei

The Regulatory Subunit of a cGMP-Regulated Protein Kinase A of Trypanosoma brucei

Tác giả: Tarek Shalaby, Matthias Liniger and Thomas Seebeck

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh, Ký sinh trùng học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này báo cáo việc xác định và đặc trưng của tiểu đơn vị điều hòa (TbRSU) của protein kinase A (PKA) ở sinh vật nguyên sinh ký sinh Trypanosoma brucei. Phân tích cho thấy TbRSU có nhiều điểm tương đồng với các tiểu đơn vị điều hòa PKA loại I ở động vật có vú, tuy nhiên, điểm khác biệt quan trọng là TbRSU liên kết và được hoạt hóa bởi cGMP thay vì cAMP. Các thí nghiệm đồng miễn dịch cho thấy hoạt tính kinase liên quan đến PKA được đồng miễn dịch cùng với TbRSU. Nghiên cứu cũng khám phá vai trò tiềm năng của cGMP trong tín hiệu tế bào ở T. brucei, một khía cạnh chưa được hiểu rõ trước đây.

Mục lục chi tiết:

• The regulatory subunit of a cGMP-regulated protein kinase A of Trypanosoma brucei
• Keywords: sleeping sickness; protein kinase A; African trypanosomes; cyclic nucleotide signalling.
• MATERIALS AND METHODS
• Materials
• Cell culture
• Transfection of S2 cells
• Preparation of the PKA-specific substrate
• Immunoprecipitation
• Protein kinase assay
• Expression of a recombinant GST-RSU fusion protein
• Expression of cNMP-binding domains in Drosophila S2 cells
• Purification of recombinant cNMP-binding domains from S2 Drosophila cells
• Cyclic nucleotide binding assays
• RESULTS
• Identification of TbRSU1
• Predicted amino-acid sequence of TbRSU
• TbRSU mRNA is more abundant in bloodstream forms
• The TbRSU protein is present both in bloodstream and in procyclic forms
• Co-immunoprecipitation of PKA with TbRSU
• PKA activity is stimulated by cGMP, but not by cAMP
• cGMP binding to the cyclic nucleotide binding domains A and B sites of TbRSU
• DISCUSSION
• ACKNOWLEDGEMENTS
• REFERENCES