Báo cáo khoa học: Tet repressor mutants with altered effector binding and allostery

Tet repressor mutants with altered effector binding and allostery

Tác giả: Eva-Maria Henßler, Ralph Bertram, Stefanie Wisshak and Wolfgang Hillen

Lĩnh vực: Vi sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khảo sát mối tương quan giữa tính allostery và khả năng gắn kết với phối tử của Tet repressor (TetR). Các đột biến tại giao diện giữa vùng đọc DNA và lõi protein đã được phân tích để đánh giá ảnh hưởng đến đặc hiệu phối tử của biến thể TetR¹². Phát hiện cho thấy rằng các đột biến trong giao diện này có thể ảnh hưởng đến cả khả năng gắn kết DNA và gắn kết phối tử, mặc dù các vị trí gắn kết phối tử không tiếp xúc trực tiếp với các gốc bị biến đổi này. Điều này cho thấy một cơ chế truyền tín hiệu mới trong TetR, vượt ra ngoài sự thay đổi cấu trúc đã được đề xuất dựa trên các cấu trúc tinh thể.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Keywords
• Correspondence
• Results
• Randomization of residues in helices a1, a4, or a6 in TetRi2
• TetRi2 variants with mutations at valine 99
• TetRi2 variants with mutations at leucine 17
• Specificity determining residues in TetRi2-V99G
• Thermodynamic analysis of atc and 4-ddma-atc binding to TetRi2-L17A and TetRi2-V99N
• Discussion
• Experimental procedures
• Materials and general methods
• Construction of the TetR mutant pools
• E. coli screening system
• B-Galactosidase assays
• Protein purification
• Fluorescence measurements
• Electrophoretic mobility shift assay
• Acknowledgements
• References