Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 74 trang
Dung lượng: 1 MB

Giới thiệu nội dung

Sử Dụng Phương Pháp Chuyển Gene Làm Tăng Khả Năng Tổng Hợp Nhựa Sinh Học Ở Chủng Vi Khuẩn Bacillus Megaterium

Tác giả: Nguyễn Trọng Linh

Lĩnh vực: Sinh học Thực nghiệm

Nội dung tài liệu:

Luận văn này tập trung nghiên cứu về việc ứng dụng kỹ thuật chuyển gene nhằm nâng cao khả năng sản xuất nhựa sinh học (PHA) của chủng vi khuẩn Bacillus megaterium. Nhựa sinh học được xem là vật liệu thay thế tiềm năng cho nhựa hóa dầu do khả năng phân hủy sinh học và thân thiện với môi trường. Tuy nhiên, chi phí sản xuất PHA hiện tại còn cao, do đó việc tìm kiếm và tạo ra các chủng vi khuẩn có khả năng sản xuất PHA hiệu quả là rất cần thiết. Nghiên cứu này tập trung vào việc lựa chọn gen đích, thiết kế primer, đọc trình tự, tách dòng gen, thiết kế vector mang gen PHA synthase, và tạo ra các chủng tái tổ hợp Bacillus megaterium có khả năng tổng hợp PHA cao. Các chủng tái tổ hợp này sau đó sẽ được đánh giá và phân tích cấu trúc nhựa sinh học thu được.

Mục lục chi tiết:

  • Lời cam đoan
  • Lời cảm ơn
  • Danh mục chữ viết tắt
  • Danh mục bảng
  • Danh mục hình
  • Mục lục
  • Mở đầu
  • Chương 1. Tổng quan tài liệu
    • 1.1. Tổng quan về nhựa sinh học
      • 1.1.1. Giới thiệu về nhựa sinh học
      • 1.1.2. Phân loại PHA
      • 1.1.3. Cấu trúc PHA
    • 1.2. Các nhân tố tham gia sinh tổng hợp nhựa sinh học
      • 1.2.1. PHA synthase
      • 1.2.2. Protein phasin
      • 1.2.3. Protein hoạt hóa
    • 1.2. Con đường sinh tổng hợp PHA
    • 1.3. Tính chất của PHA
    • 1.4. Vi khuẩn Bacillus megaterium
    • 1.5. Ứng dụng của PHA
      • 1.5.1. Ứng dụng trong đời sống sản xuất
      • 1.5.2. Ứng dụng trong y sinh
    • 1.6. Tình hình nghiên cứu trên thế giới
    • 1.7. Tình hình nghiên cứu trong nước
  • Chương 2. Vật liệu và phương pháp
    • 2.1. Địa điểm nghiên cứu
    • 2.2. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu
      • 2.2.1. Chủng giống
      • 2.2.2. Plasmid
      • 2.2.3. Hóa chất
      • 2.2.4. Thiết bị
      • 2.2.5. Môi trường
      • 2.2.6. Chất bổ sung
    • 2.3. Phương pháp nghiên cứu
      • 2.3.1. Chuẩn bị chủng giống
      • 2.3.2. Tách chiết DNA tổng số
      • 2.3.3. Tách chiết DNA plasmid E. coli
      • 2.3.4. Tách chiết DNA plasmid Bacillus
      • 2.3.5. Phương pháp PCR
      • 2.3.6. Cắt DNA bằng enzyme giới hạn và gắn DNA
      • 2.3.7. Biến nạp DNA plasmid vào chủng chủ E. coli
      • 2.3.8. Biến nạp DNA plasmid vào chủng chủ Bacillus
      • 2.3.9. Phương pháp tách PHA
      • 2.3.10. Phương pháp Crotonic xác định hàm lượng nhựa sinh học
      • 2.3.11. Phương pháp nuôi sinh khối vi sinh vật tạo nhựa sinh học
      • 2.3.12. Phương pháp phân tích cấu trúc nhựa sinh học thu được từ vi khuẩn
      • 2.3.13. Phân tích thống kê
      • 2.3.14. Phương pháp tinh sạch DNA từ gel agarose
  • Chương 3. Kết quả nghiên cứu
    • 3.1. Kết quả lựa chọn gen đích để can thiệp gen và phân tích trình tự gen đích
    • 3.2. Tạo chủng tái tổ hợp tăng cường biểu hiện gen phaC
      • 3.2.1. Thiết kế vector tái tổ hợp pPSP6
      • 3.2.2. Tạo chủng tái tổ hợp B. megaterium DV01 mang vector PPSP6/phaC
    • 3.3. Sàng lọc chủng chứa vector tái tổ hợp pPSP6/phaC có khả năng tổng hợp PHA cao
    • 3.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố lên khả năng sinh trưởng và sinh tổng hợp PHA của chủng tái tổ hợp tạo thành
      • 3.4.1. Ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy lên khả năng sinh trưởng và sinh tổng hợp PHA
      • 3.4.2. Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến khả năng sinh trưởng và sinh tổng hợp PHA của các chủng tuyển chọn
      • 3.4.3. Ảnh hưởng của nồng độ chất cảm ứng đến khả năng sinh trưởng và tích lũy PHA của chủng tái tổ hợp
    • 3.5. Phân tích, xác định cấu trúc nhựa sinh học của chủng tái tổ hợp
      • 3.5.1. Phân tích phổ hồng ngoại của PHA từ chủng tái tổ hợp
      • 3.5.2. Phân tích phổ cộng hưởng từ – NMR của PHA từ chủng tái tổ hợp
  • Chương 4. Kết luận và kiến nghị
    • Kết luận
    • Kiến nghị
  • Danh mục công trình của tác giả
  • Tài liệu tham khảo
  • Phụ lục