Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 10 trang
Dung lượng: 169 KB

Giới thiệu nội dung

Stage-specific expression of Caenorhabditis elegans ribonuclease H1 enzymes with different substrate specificities and bivalent cation requirements

Tác giả: Hiromi Kochiwa, Mitsuhiro Itaya, Masaru Tomita, Akio Kanai

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá sự biểu hiện theo giai đoạn và đặc điểm xúc tác của các enzyme ribonuclease H1 (RNase H1) trong sinh vật mô hình Caenorhabditis elegans. Khác với hầu hết sinh vật nhân chuẩn chỉ có một gen mã hóa RNase H1, C. elegans sở hữu bốn gen liên quan đến RNase H1, trong đó có một gen có các dạng đồng phân do nối tắt thay thế. Công trình tập trung vào việc so sánh các mẫu biểu hiện gen và hoạt tính xúc tác của các protein RNase H1 tái tổ hợp. Kết quả cho thấy sự biểu hiện gen đặc trưng và các đặc điểm xúc tác khác biệt giữa các enzyme này. Đáng chú ý, bên cạnh enzyme hoạt động mạnh với Mg2+, C. elegans còn có một enzyme thể hiện sự ưa thích đối với Mn2+ như một ion đồng yếu tố, một đặc điểm chưa từng được ghi nhận ở RNase H1 nhân chuẩn trước đây. Những phát hiện này gợi ý rằng có ít nhất hai loại RNase H1 tồn tại trong C. elegans, với vai trò khác nhau tùy thuộc vào giai đoạn phát triển của sinh vật.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Cấu trúc chính của nhiều enzyme RNase H1 ở C. elegans
  • Đặc điểm xúc tác của các RNase H1 ở C. elegans trên RNA-DNA/DNA lai
  • Biểu hiện gen RNase H trong quá trình phát triển của C. elegans
  • Độ đặc hiệu cắt của các enzyme RNase H1 ở C. elegans trên RNA-DNA/DNA lai
  • Sự ưa thích ion kim loại của các enzyme RNase H1 ở C. elegans
  • Phân tích so sánh các gen mã hóa RNase H1 ở C. elegans và C. briggsae
  • Quy trình thực nghiệm
  • Nuôi cấy giun C. elegans
  • Phân tích RT-PCR
  • Tạo dòng cDNA
  • Biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp
  • Xét nghiệm hoạt tính RNase H trong ống nghiệm
  • Phân tích động học
  • Phân tích so sánh C. elegans và C. briggsae
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo
  • Tài liệu bổ sung