Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 7 trang
Dung lượng: 150 KB

Giới thiệu nội dung

SF2/ASF Protein Inhibits Camptothecin-Induced DNA Cleavage by Human Topoisomerase I

Tác giả: Barbara Kowalska-Loth, Agnieszka Girstun, Agnieszka Piekiełko and Krzysztof Staroń

Lĩnh vực: Biochemistry

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này khám phá vai trò của protein SF2/ASF, một cơ chất tự nhiên của enzyme topoisomerase I (topo I) ở người, trong việc ức chế quá trình phân cắt DNA do camptothecin gây ra. SF2/ASF đã được chứng minh là ức chế sự phân cắt DNA do human topoisomerase I (htopo I) gây ra khi có mặt camptothecin. Cơ chế chính của sự ức chế này là do giảm sự hình thành phức hợp phân cắt, một bước trung gian trong chu trình xúc tác của htopo I. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng sự ức chế này không phụ thuộc vào trạng thái phosphoryl hóa của SF2/ASF và không phải do SF2/ASF liên kết với DNA cản trở tương tác giữa htopo I và DNA, hay do làm giảm độ nhạy của enzyme với camptothecin. Ngoài ra, SF2/ASF cũng làm chậm quá trình làm giãn DNA do htopo I xúc tác. Những phát hiện này gợi ý rằng SF2/ASF có thể đóng vai trò bảo vệ chống lại tổn thương DNA do camptothecin gây ra, đặc biệt là trong các vùng chromatin hoạt động sao chép.

Mục lục chi tiết:

  • SF2/ASF protein inhibits camptothecin-induced DNA cleavage by human topoisomerase I
  • Keywords: topoisomerase I; SF2/ASF; camptothecin.
  • MATERIALS AND METHODS
  • Plasmids and strains
  • Expression and purification of proteins
  • DNA cleavage assay
  • Mobility shift assay
  • Relaxation assay
  • Kinase assay
  • RESULTS
  • Inhibition of the DNA cleavage by SF2/ASF
  • Accessibility of DNA for htopo I
  • Sensitivity of the kinase reaction of htopo I to camptothecin
  • Inhibition of formation of the cleavable complex by SF2/ASF in the absence of camptothecin
  • Effect of SF2/ASF on DNA relaxation
  • DISCUSSION
  • ACKNOWLEDGEMENTS
  • REFERENCES