Báo cáo khoa học: Purification, cDNA cloning, and expression profiles of the cyclobutane pyrimidine dimer photolyase of Xenopus laevis

Purification, cDNA Cloning, and Expression Profiles of the Cyclobutane Pyrimidine Dimer Photolyase of Xenopus laevis

Tác giả: Hiroaki Tanida, Eiji Tahara, Miwa Mochizuki, Yukiko Yamane và Masaru Ryoji

Lĩnh vực: Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc làm sáng tỏ enzyme photolyase sửa chữa dimer pyrimidine cyclobutane (CPD photolyase) ở loài ếch Xenopus laevis. Các nhà nghiên cứu đã phân lập vùng mã hóa hoàn chỉnh của cDNA CPD photolyase, phân tích trình tự nucleotide và xác định protein với 557 axit amin, có sự tương đồng cao với CPD photolyase của chuột kangaroo. Nghiên cứu cũng đã tiến hành tinh sạch enzyme và xác định khối lượng phân tử của protein CPD photolyase chính từ buồng trứng của Xenopus. Kết quả cho thấy gen của enzyme này được biểu hiện ở nhiều mô khác nhau của Xenopus, bao gồm cả các cơ quan nội tạng như tim, với mức độ mRNA tương đối cao. Mặc dù da là mô tiếp xúc nhiều nhất với tia UV, nhưng mức độ biểu hiện mRNA của CPD photolyase lại thấp hơn. Những hồ sơ biểu hiện này gợi ý rằng CPD photolyase có thể có những vai trò khác ngoài chức năng sửa chữa quang học.

Mục lục chi tiết:

• Purification, cDNA cloning, and expression profiles of the cyclobutane pyrimidine dimer photolyase of Xenopus laevis
• Keywords
• Correspondence
• Present address
• Note
• Results
• Isolation and sequence determination of cDNA for the putative CPD photolyase
• Fig. 1. Strategies for sequencing the putative CPD photolyase cDNA.
• Fig. 2. Nucleotide sequence of the putative CPD photolyase cDNA.
• Fig. 3. Amino acid sequence of the putative CPD photolyase.
• Purification of Xenopus CPD photolyase
• Fig. 4. Ammonium sulfate fractionation of Xenopus ovary extracts for CPD photolyase.
• Fig. 5. Carboxymethyl (CM)/cellulose chromatography.
• Fig. 6. Affinity chromatography.
• Fig. 7. SDS/PAGE of the affinity chromatography fractions.
• Table 1. Summary of CPD photolyase purification.
• Partial amino acid sequence determination
• Table 2. Mass spectrometry of the purified 65-kDa protein.
• Expression of CPD photolyase in various tissues of Xenopus
• Fig. 8. Expression of CPD photolyase mRNA in various tissues of adult Xenopus.
• Discussion
• Experimental procedures
• Database search for CPD photolyase-like EST sequences
• Cloning and sequence determination of a putative CPD photolyase cDNA
• Table 3. Primers used for cloning and sequencing.
• Photolyase assay
• Purification of photolyase
• Determination of partial amino acid sequences of the purified protein
• Extraction of RNA from frog tissues and organs
• Electrophoretic evaluation of total RNA
• RT-PCR of CPD photolyase mRNA
• References