Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 192 KB

Giới thiệu nội dung

Purification and Characterization of Two Secreted Purple Acid Phosphatase Isozymes from Phosphate-Starved Tomato (Lycopersicon esculentum) Cell Cultures

Tác giả: Gale G. Bozzo, Kashchandra G. Raghothama, William C. Plaxton

Lĩnh vực: Sinh học và Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày quá trình tinh sạch và đặc tính hóa hai dạng isozyme acid phosphatase (SAP1 và SAP2) được tiết ra từ môi trường nuôi cấy tế bào cà chua (Lycopersicon esculentum) khi thiếu hụt phosphate. Hai isozyme này được biểu hiện tăng cường trong điều kiện thiếu hụt phosphate, có hoạt tính thủy phân p-nitrophenylphosphate cao. Kết quả phân tích cho thấy SAP1 và SAP2 là các glycoprotein đơn phân tử, có khối lượng phân tử tương ứng là 84 kDa và 57 kDa. Cả hai đều là các enzyme purple acid phosphatase (PAPs) với điểm pH tối ưu khoảng 5.3 và có khả năng chịu nhiệt. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng SAP1 và SAP2 có hoạt tính peroxidase ở pH kiềm, cho thấy chúng có thể đóng vai trò đa chức năng trong phản ứng phòng vệ của cây.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Materials and Methods
    • Chemicals and plant material
    • AP assays
      • Phosphatase assay A
      • Phosphatase assay B
    • Kinetic studies and protein concentration determination
    • Peroxidase assay
    • Buffers used during AP purification
    • AP purification
    • Estimation of native molecular mass by gel filtration FPLC
    • Electrophoresis
  • Amino acid sequencing
  • Peptide mapping by CNBr cleavage
  • Results
    • Influence of Pi starvation on growth and secreted AP activity of tomato suspension cells
    • AP purification
    • Gel electrophoresis and physical properties
    • Peptide mapping and amino acid sequencing
    • Kinetic properties
    • Effect of divalent cations
    • Substrate specificity
    • Metabolite and ion effects
    • Peroxidase activity
  • Discussion
    • Purification and physical properties of SAP1 and SAP2
    • Kinetic properties of SAP1 and SAP2
    • Peroxidase activity
  • Acknowledgements
  • References