Báo cáo Y học: Purification and biochemical characterization of some of the properties of recombinant human kynureninase

Purification And Biochemical Characterization Of Some Of The Properties Of Recombinant Human Kynureninase

Tác giả: Harold A. Walsh and Nigel P. Botting

Lĩnh vực: Biochemistry, Enzyme Kinetics

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này trình bày quá trình tinh chế và đặc tính hóa sinh học của enzyme kynureninase tái tổ hợp từ người. Enzyme được biểu hiện trong tế bào côn trùng Spodoptera frugiperda (Sf9) và được tinh chế tới độ thuần cao. Quá trình tinh chế bao gồm kết tủa amoni sulfat và các bước sắc ký khác nhau. Enzyme có khối lượng phân tử đơn phân là 52.4 kDa và đạt đỉnh hấp thụ UV tại 432 nm. pH tối ưu hoạt động là 8.25, và enzyme thể hiện sự phụ thuộc mạnh mẽ vào cường độ ion của dung dịch đệm. Enzyme này thể hiện tính đặc hiệu cao đối với 3-hydroxykynurenine, với hằng số Michaelis (Km) là 3.0 µm. L-kynurenine, D-kynurenine và một chất tương tự chất nền tổng hợp cũng ức chế enzyme. Hồ sơ hoạt động/nồng độ của kynureninase từ nguồn này cho thấy động học sigmoidal. Nghiên cứu cũng đề cập đến khả năng ức chế một phần bởi chất nền và sự ức chế bởi pyridoxal 5′-phosphate dư thừa.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Results
• Discussion
• Conclusions
• Acknowledgements
• References