Báo cáo khoa học: Procarboxypeptidase A from the insect pest Helicoverpa armigera and its derived enzyme

Procarboxypeptidase A from the Insect Pest Helicoverpa Armigera and Its Derived Enzyme

Tác giả: Alex Bayés, Anka Sonnenschein, Xavier Daura, Josep Vendrell, Francesc X. Aviles

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày đặc điểm sinh hóa của một loại procarboxypeptidase A (PCPAHa) từ côn trùng gây hại Helicoverpa armigera, một loài gây hại lan rộng ở nhiều vùng khí hậu. Quá trình hoạt hóa tiền enzyme này cho thấy sự khác biệt đáng kể so với các dạng động vật có vú, với enzyme LysC hoạt hóa hiệu quả hơn trypsin. Enzyme đã hoạt hóa (CPAHa) thể hiện phổ hoạt động rộng, có khả năng thủy phân hiệu quả các gốc axit amin cơ bản và aliphatic, và ở mức độ thấp hơn là các gốc axit. Nghiên cứu cũng đề cập đến các chất ức chế enzyme từ thực vật và đỉa, với một chất ức chế từ khoai tây cho thấy hiệu quả cao. Ngoài ra, bài báo còn mô tả việc biểu hiện và tinh chế protein tái tổ hợp, các nghiên cứu về động học enzyme, và phân tích cấu trúc thông qua mô hình hóa phân tử.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Plasmids constructs
• Transformation and selection of the productive clones
• Expression and purification of the recombinant enzyme
• Activity assays
• Deglycosylation assay
• Kinetic measurements
• Activation studies of recombinant H. armigera PCPAHa
• Activation studies; effect of glycosylation and determination of species produced during activation
• Characterization of substrate specificities of CPA from H. armigera
• Measurement of equilibrium dissociation constant (Ki) for protein inhibitors
• Molecular modelling and dynamics simulation
• Discussion
• Acknowledgements
• References
• Supplementary material