Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 15 trang
Dung lượng: Đang cập nhật

Giới thiệu nội dung

Phosphorylation Is the Major Mechanism Regulating Isocitrate Lyase Activity in Paracoccidioides brasiliensis Yeast Cells

Tên đề tài: Phosphorylation is the major mechanism regulating isocitrate lyase activity in Paracoccidioides brasiliensis yeast cells

Tác giả: Aline H. da Silva Cruz, Matthias Brock, Patrícia F. Zambuzzi-Carvalho, Ludier K. Santos-Silva, Rogério F. Troian, Alfredo M. Góes, Célia M. de Almeida Soares, and Maristela Pereira

Lĩnh vực: Sinh hóa và Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào enzyme isocitrate lyase (PbICL) trong nấm mốc sinh bệnh Paracoccidioides brasiliensis, một enzyme quan trọng trong chu trình glyoxylate. Chu trình này đóng vai trò thiết yếu trong việc cung cấp các tiền chất cho quá trình trao đổi chất, đặc biệt khi vi sinh vật sử dụng các nguồn carbon thay thế như acetate hoặc axit béo. Nghiên cứu đã điều tra các cơ chế điều hòa biểu hiện gen và hoạt động của enzyme PbICL. Kết quả cho thấy rằng, không giống như các loài Aspergillus liên quan chặt chẽ, enzyme Pbicl được biểu hiện liên tục trong các tế bào nấm men. Tuy nhiên, hoạt động của PbICL lại thấp khi tế bào phát triển trong môi trường glucose. Các phân tích về việc điều hòa sau dịch mã đã phát hiện ra rằng sự phosphoryl hóa protein là cơ chế chính điều chỉnh hoạt động của PbICL trong các tế bào nấm men này. Quá trình khử phosphoryl hóa PbICL từ các tế bào phát triển trong glucose đã làm tăng đáng kể hoạt động của enzyme, tương tự như các tế bào phát triển trong acetate. Điều này cho thấy rằng quá trình phosphoryl hóa làm bất hoạt PbICL và quá trình này có thể đảo ngược, đưa ra một chiến lược mới để thích ứng nhanh chóng với các điều kiện môi trường thay đổi.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Phân tích in silico chu trình glyoxylate và trình tự acid amin suy ra
  • Phân tích bộ gen và phân tích trình tự dựa trên máy tính
  • So sánh chu trình glyoxylate của nấm và suy ra cây phát sinh chủng loại
  • Biểu hiện dị loài và tinh sạch PbICL tái tổ hợp
  • Sản xuất kháng thể
  • Điều kiện nuôi cấy P. brasiliensis để chiết xuất RNA và protein
  • Phân tích RNA và phân tích RT-PCR định lượng
  • Chiết xuất protein từ tế bào nấm men P. brasiliensis và xác định hoạt tính ICL
  • Điện di protein
  • Phân tích western blot
  • Phân tích điện di gel hai chiều, western blot và phân tích MALDI-TOF của các chiết xuất nuôi cấy acetate từ A. fumigatus
  • Trong điều kiện khử phosphoryl hóa PbICL mà không có o-vanadate
  • Các điểm hỗ trợ