Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 235 KB

Giới thiệu nội dung

Nuclear proteins that bind to metal response element a (MREa) in the Wilson disease gene promoter are Ku autoantigens and the Ku-80 subunit is necessary for basal transcription of the WD gene

Tác giả: Won Jun Oh, Eun Kyung Kim, Jung Ho Ko, Seung Hee Yoo, Si Houn Hahn, and Ook-Joon Yoo

Lĩnh vực: Khoa học sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định các yếu tố protein hạt nhân liên kết với yếu tố phản ứng kim loại alpha (MREa) trong vùng promoter của gen bệnh Wilson (WD). Các kết quả cho thấy các protein liên kết MREa này có liên quan đến kháng nguyên Ku và đặc biệt là tiểu đơn vị Ku-80 đóng vai trò thiết yếu trong quá trình phiên mã cơ bản của gen WD. Các thử nghiệm đã sử dụng nhiều phương pháp, bao gồm thử nghiệm dịch chuyển điện di di chuyển (EMSA), phân tích trình tự axit amin, RNAi và phân tích hoạt tính promoter. Nghiên cứu chỉ ra rằng MREa là yếu tố điều hòa phiên mã quan trọng nhất của gen WD, và Ku-80 là một yếu tố cần thiết cho biểu hiện gen WD.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và Phương pháp
  • Nuôi cấy tế bào
  • Cấu trúc gen báo cáo promoter WD ở người
  • Chuyển gen và xét nghiệm luciferase
  • Chuẩn bị chiết xuất nhân HepG2
  • EMSA
  • Phân tích Western blot
  • Chuẩn bị primers và điều kiện cho phân tích RT-PCR cạnh tranh
  • Kết quả
  • Ảnh hưởng của đột biến MREa đến hoạt tính promoter gen WD trong tế bào HepG2
  • Xác định các protein tương tác đặc hiệu với MREa
  • Đặc tính hóa và tinh sạch các yếu tố liên kết MREa
  • Phân tích trình tự axit amin N-terminal của các protein Ku liên kết MREa đã tinh sạch
  • Xây dựng gen IR Ku-80 và Ku-80 bị cắt cụt (AKu80)
  • Phân tích RT-PCR cạnh tranh
  • Phân tích Western blot
  • Thảo luận
  • So sánh hoạt tính promoter WD trong tế bào Xrs-5 thiếu Ku với hoạt tính trong tế bào CHO
  • Tài liệu tham khảo