Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: Đang cập nhật

Giới thiệu nội dung

NMR Study of Complexes Between Low Molecular Mass Inhibitors and the West Nile Virus NS2B-NS3 Protease

Tác giả: Xun-Cheng Su, Kiyoshi Ozawa, Hiromasa Yagi, Siew P. Lim, Daying Wen, Dariusz Ekonomiuk, Danzhi Huang, Thomas H. Keller, Sebastian Sonntag, Amedeo Caflisch, Subhash G. Vasudevan, Gottfried Otting

Lĩnh vực: Drug development; Inhibitors; NMR spectroscopy; NS2B-NS3 protease; West Nile virus

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này trình bày các phương pháp để biểu hiện mẫu protein NS2B-NS3 protease của virus West Nile (WNV) có gắn nhãn đồng vị bền vững trong cả môi trường in vivo và in vitro. Sử dụng kỹ thuật cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), nhóm nghiên cứu đã xác định được phương thức liên kết của các chất ức chế phân tử nhỏ mới đối với enzyme này, vốn được phát hiện thông qua sàng lọc hiệu suất cao. Kết quả cho thấy các chất ức chế này chiếm giữ vị trí gắn kết chất nền S1 và S3, điều này được xác nhận bằng các thí nghiệm NOE liên phân tử và so sánh với một chất ức chế đã biết trước đó. Một điểm quan trọng được rút ra là các hợp chất ức chế này hoạt động bằng cách chiếm dụng vị trí gắn kết chất nền của protease, thay vì tác động theo cơ chế dị lập thể. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng chuỗi polypeptide NS2B có vị trí gần với nơi gắn kết chất nền, tương tự như quan sát trong các cấu trúc tinh thể trước đây của protease khi phức hợp với các chất ức chế peptide. Điều này gợi ý rằng các hợp chất phân tử nhỏ mới, ngoài việc ức chế protease, còn thúc đẩy cấu hình hoạt động về mặt xúc tác của NS2B, một cấu hình khác biệt đáng kể so với cấu trúc tinh thể của protein khi không có chất ức chế.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả
  • Chuẩn bị mẫu
  • Chuẩn bị protein WNV NS2B-NS3pro gắn nhãn 15N
  • Chuẩn bị protein WNV NS2B-NS3pro gắn nhãn 13C/15N
  • Chuẩn bị protein WNV NS2B-NS3pro(K96A) gắn nhãn 13C/15N
  • Tổng hợp protein WNV NS2B-NS3pro bằng phương pháp tế bào không chứa thành phần
  • Tổng hợp protein WNV NS2B-NS3pro gắn nhãn 15N-Gly bằng phương pháp tế bào không chứa thành phần
  • Đo lường NMR
  • Tương tác ức chế được theo dõi bằng phổ NMR
  • Gán phổ cộng hưởng
  • Cấu trúc WNV NS2B-NS3pro được tạo ra bởi các chất ức chế
  • Vị trí gắn kết chất ức chế
  • Xây dựng mô hình
  • Thảo luận
  • Vật liệu và Phương pháp
  • Tài liệu tham khảo
  • Thông tin bổ sung