Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 112 trang
Dung lượng: 1 MB

Giới thiệu nội dung

Nghiên cứu tạo dòng và tối ưu điều kiện biểu hiện gen mã hóa nattokinase trong Bacillus subtilis BD170 tái tổ hợp

Tác giả: Nguyễn Thị Anh Thư

Lĩnh vực: Công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu: Luận án tiến sĩ tập trung vào việc nghiên cứu tạo dòng và tối ưu điều kiện biểu hiện gen mã hóa nattokinase trong vi khuẩn Bacillus subtilis BD170 tái tổ hợp. Mục tiêu chính là phân lập, tạo dòng gen mã hóa nattokinase từ các chủng Bacillus subtilis tự nhiên và biểu hiện thành công enzyme này trong chủng B. subtilis BD170. Nattokinase tái tổ hợp được kỳ vọng sẽ biểu hiện mạnh và có khả năng phân hủy cục máu đông. Nghiên cứu bao gồm các bước phân lập gen, tạo dòng gen trong vector biểu hiện, biểu hiện nattokinase tái tổ hợp, tinh sạch enzyme bằng hệ hai pha nước, và phân tích các đặc điểm của enzyme. Luận án cũng thảo luận về ý nghĩa khoa học và thực tiễn của việc sản xuất nattokinase bằng công nghệ DNA tái tổ hợp, góp phần phát triển các sản phẩm bảo vệ sức khỏe.

Mục lục chi tiết:

  • Lời cảm ơn
  • Lời cam đoan
  • Danh mục chữ viết tắt
  • Mục lục
  • Danh mục các bảng
  • Danh mục các hình
  • Mở đầu
  • Chương 1. Tổng quan tài liệu
    • 1.1. Giới thiệu về nattokinase
      • 1.1.1. Đặc điểm của nattokinase
      • 1.1.2. Nguồn sản xuất nattokinase
        • 1.1.2.1. Vi khuẩn Bacillus
        • 1.1.2.2. Các nguồn sinh vật khác
      • 1.1.3. Ứng dụng của nattokinase
        • 1.1.3.1. Ứng dụng trong chống đông máu
        • 1.1.3.2. Các ứng dụng khác
    • 1.2. Hệ thống biểu hiện Bacillus subtilis
      • 1.2.1. Vi khuẩn Bacillus subtilis
      • 1.2.2. Hệ thống vector biểu hiện ở Bacillus
      • 1.2.3. Hệ thống tiết ở Bacillus
    • 1.3. Ứng dụng Bacillus subtilis trong sản xuất enzyme tái tổ hợp
      • 1.3.1. Nattokinase
      • 1.3.2. Các enzyme khác
    • 1.4. Tinh sạch enzyme bằng hệ 2 pha nước
      • 1.4.1. Cấu tạo và đặc tính của hệ hai pha nước
      • 1.4.2. Ứng dụng hệ hai pha trong tinh sạch enzyme
  • Chương 2. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
    • 2.1. Đối tượng nghiên cứu
    • 2.2. Phương pháp nghiên cứu
      • 2.2.1. Phân lập gen mã hóa nattokinase từ các chủng B. subtilis C10 và N05
      • 2.2.2. Tạo dòng gen mã hóa nattokinase trong tế bào E. coli TOP10
      • 2.2.3. Biến nạp vector pHT43/nat05 và pHT43/natC10 vào Bacillus subtilis BD170
      • 2.2.4. Biểu hiện nattokinase bằng hệ thống vector pHT43
      • 2.2.5. Xác định hoạt tính nattokinase
      • 2.2.6. Ảnh hưởng của một số yếu tố lên hoạt tính phân giải fibrin
      • 2.2.7. Thử nghiệm khả năng phân giải fibrin trong máu thỏ bằng nattokinase tái tổ hợp
      • 2.2.8. Tinh sạch nattokinase tái tổ hợp bằng hệ hai pha nước
    • 2.3. Xử lý thống kê
  • Chương 3. Kết quả nghiên cứu
    • 3.1. Phân lập gen mã hóa nattokinase từ các chủng Bacillus subtilis
      • 3.1.1. Khuếch đại gen mã hóa nattokinase từ các chủng B. subtilis
      • 3.1.2. Tạo dòng gen nattokinase giả định trong vector pCR®2.1
      • 3.1.3. Xác định trình tự gen nattokinase giả định từ các chủng B. subtilis
    • 3.2. Tạo dòng gen nat05 và natC10 trong Bacillus subtilis BD170
      • 3.2.1. Tạo dòng gen nat05 và natC10 vào vector pHT43
      • 3.2.2. Biến nạp vector pHT43 tái tổ hợp vào B. subtilis BD170
    • 3.3. Biểu hiện nattokinase tái tổ hợp trong Bacillus subtilis BD170
      • 3.3.1. Xác định dòng B. subtilis BD170 biểu hiện nattokinase mạnh
      • 3.3.2. Đặc điểm của nattokinase tái tổ hợp ở dòng R4
    • 3.4. Tinh sạch nattokinase bằng hệ hai pha nước
      • 3.4.1. Ảnh hưởng của khối lượng phân tử PEG
      • 3.4.2. Ảnh hưởng của nồng độ potassium phosphate
      • 3.4.3. Thu hồi enzyme
      • 3.4.4. Xác định khối lượng phân tử của nattokinase tái tổ hợp
  • Chương 4. Thảo luận
    • 4.1. Phân lập gen mã hóa nattokinase từ các chủng Bacillus subtilis
    • 4.2. Tạo dòng gen nat05 và natC10 trong vector biểu hiện pHT43
    • 4.3. Biểu hiện nattokinase tái tổ hợp ở Bacillus subtilis
      • 4.3.1. Biểu hiện gen mã hóa nattokinase
      • 4.3.2. Ảnh hưởng của một số yếu tố lên hoạt tính phân giải fibrin
      • 4.3.3. Thử nghiệm khả năng phân giải cơ chất của nattokinase
    • 4.4. Tinh sạch nattokinase bằng hệ hai pha nước
  • Kết luận và kiến nghị
    • 1. Kết luận
    • 2. Kiến nghị
  • Danh mục công trình liên quan đến luận án
  • Tài liệu tham khảo