Báo cáo khoa học: N-Methyl-L-amino acid dehydrogenase from Pseudomonas putida A novel member of an unusual NAD(P)-dependent oxidoreductase superfamily

N-Methyl-L-amino acid dehydrogenase from Pseudomonas putida

Tác giả: Hisaaki Mihara, Hisashi Muramatsu, Ryo Kakutani, Mari Yasuda, Makoto Ueda, Tatsuo Kurihara and Nobuyoshi Esaki

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc phát hiện, phân lập, tinh sạch và đặc tính hóa một enzyme mới có tên N-methyl-L-amino acid dehydrogenase (NMAADH) từ vi khuẩn Pseudomonas putida. Enzyme này có khả năng xúc tác cho phản ứng hình thành N-alkyl-L-amino acid từ các a-oxo acid tương ứng và alkylamine, với NADPH là đồng yếu tố hiến tặng hydro. NMAADH cho thấy sự khác biệt rõ rệt so với các amino acid dehydrogenase và opine dehydrogenase thông thường, đặc biệt là khả năng không sử dụng amoniac làm cơ chất và có ái lực cao hơn đối với methylamine so với các amine khác. Phân tích trình tự amino acid cho thấy NMAADH thuộc về một siêu họ oxidoreductase NAD(P)-phụ thuộc mới, có cấu trúc khác biệt so với các enzyme đã biết.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Note
• Database
• Introduction
• Results and Discussion
• Identification of a gene encoding N-methyl-L-amino acid dehydrogenase (NMAADH)
• Cloning and sequencing of the gene encoding NMAADH
• Purification and subunit structure of NMAADH
• Substrate specificity and effects of various compounds on the enzymatic activity
• Other enzymological properties
• Kinetic studies
• Comparison with other NAD(P)-dependent dehydrogenases
• Conclusion
• Experimental procedures
• Materials
• Culture and screening of bacteria
• Purification of recombinant NMAADH
• Effect of various compounds on the activity
• Kinetic analysis
• Analytical size-exclusion chromatography
• Other analytical methods
• Acknowledgements
• References