Báo cáo khoa học: Molecular characterization and allergenic activity of Lyc e 2 (b-fructofuranosidase), a glycosylated allergen of tomato

Molecular Characterization and Allergenic Activity of Lyc e 2 (β-fructofuranosidase), a Glycosylated Allergen of Tomato

Tác giả: Sandra Westphal, Daniel Kolarich, Kay Foetisch, Iris Lauer, Friedrich Altmann, Amedeo Conti, Jesus F. Crespo, Julia Rodríguez, Ernesto Enrique, Stefan Vieths, and Stephan Scheurer

Lĩnh vực: Allergology, Biochemistry

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích cấu trúc và hoạt tính gây dị ứng của Lyc e 2, một protein glycosylated từ cà chua. Lyc e 2, hay còn gọi là β-fructofuranosidase, là một enzyme xúc tác quá trình thủy phân sucrose thành glucose và fructose. Bài báo trình bày chi tiết quá trình tinh sạch Lyc e 2 tự nhiên từ cà chua, mô tả cấu trúc của các glycan gắn liền và so sánh hoạt tính gây dị ứng của protein tự nhiên với các dạng tái tổ hợp không glycosylated. Kết quả cho thấy hoạt tính IgE của Lyc e 2 tự nhiên chủ yếu phụ thuộc vào cấu trúc glycan, cụ thể là các gốc xylose và fucose. Protein tái tổ hợp, do thiếu quá trình biến đổi sau dịch mã như glycosylation, không thể hiện hoạt tính gây dị ứng tương tự, nhấn mạnh vai trò quan trọng của các cấu trúc carbohydrate trong phản ứng dị ứng với Lyc e 2.

Mục lục chi tiết:

• Molecular characterization and allergenic activity of Lyc e 2 (β-fructofuranosidase), a glycosylated allergen of tomato
• Materials and methods
• Preparation of allergen extract
• Purification of N-linked glycopeptides
• Purification of natural Lyc e 2 from tomato fruit
• N-terminal amino acid sequencing
• Cloning the cDNAs of two isoforms of β-fructofuranosidase from tomato fruit
• Recombinant protein expression and purification
• Patients’ sera
• Determination of specific IgE
• IgE immunoblot and IgE immunoblot inhibition
• Results
• Screening of patients’ sera
• Two step purification of Lyc e 2 from tomato extract
• N-Terminal amino acid sequencing
• Cloning of the cDNA of two isoforms of tomato β-fructofuranosidase and recombinant expression in E. coli
• Comparison of IgE-reactivities of the purified natural and recombinant Lyc e 2
• IgE reactivity of the native allergen is completely inhibited by the bromelain glycopeptide MUXF
• Peptide map and glycan analysis of the natural β-fructofuranosidase
• The carbohydrates of nLyc e 2 are able to trigger histamine release from human basophils
• Discussion
• Acknowledgments
• References