Báo cáo khoa học: Krit 1 interactions with microtubules and membranes are regulated by Rap1 and integrin cytoplasmic domain associated protein-1

Krit 1 Interactions With Microtubules and Membranes Are Regulated by Rap1 and Integrin Cytoplasmic Domain Associated Protein-1

Tác giả: Sophie Béraud-Dufour, Romain Gautier, Corinne Albiges-Rizo, Pierre Chardin, Eva Faurobert

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Tế bào học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá cách protein Rap1 và ICAP-1 điều chỉnh sự tương tác của Krit1 với vi ống và màng tế bào. Các kết quả cho thấy Krit1 tồn tại ở hai dạng cấu hình: đóng và mở. Rap1 liên kết với miền FERM của Krit1 ở cả hai dạng này mà không làm thay đổi cấu hình, trong khi ICAP-1 mở Krit1. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng Krit1 liên kết với vi ống và màng tế bào, và sự liên kết này bị ức chế bởi Rap1 và ICAP-1. Rap1 cũng kích thích sự liên kết của Krit1 với màng.

Mục lục chi tiết:

• Krit 1 interactions with microtubules and membranes are regulated by Rap1 and integrin cytoplasmic domain associated protein-1
• Keywords
• Correspondence
• The small G protein Rap1 regulates diverse cellular processes…
• Abbreviations
• Rap1 regulates Krit1 microtubule and lipid binding
• Krit1 contains a putative FERM domain and binds to PIP2
• Krit1 exists in a closed conformation opened by ICAP-1
• Krit1 interacts with Rap1 preferentially in its GTPγS bound form
• Rap1 binds to the C-terminus of Krit1
• Krit1, Rap1 and ICAP-1 form a ternary complex in vitro
• Rap1 binds equally to Krit1 opened and closed conformations and does not open Krit1
• Krit1 interacts in vitro with microtubules via two sites present, respectively, on its N- and C-termini
• Rap1 and ICAP-1 inhibit in vitro Krit1 binding to microtubules
• YFP-Krit1 colocalizes with CFP-labelled microtubules in transfected BHK cells and is delocalized from microtubules by activated Rap1
• Rap1 enhances HypoKrit1 binding to asolectin vesicles
• Discussion
• Krit1 is a Rap1 partner
• Experimental procedures
• Plasmid constructions
• Purification of recombinant proteins
• Preloading of Rap1 with GDP or GTPγS
• GST pull-down
• Cell culture and transfection
• FLAG pull-down
• Microtubule sedimentation experiments
• Tubulin purification and polymer preparation
• Sedimentation experiments
• Immunofluorescence and cell microscopy
• Asolectin vesicles and liposome sedimentation experiments
• Asolectin vesicles and liposomes preparation
• Sedimentation experiments
• Modelling of Krit1 FERM domain
• Acknowledgements
• References