Báo cáo khoa học: Insights into the interaction of human arginase II with substrate and manganese ions by site-directed mutagenesis and kinetic studies Alteration of substrate specificity by replacement of Asn149 with Asp

Insights into the interaction of human arginase II with substrate and manganese ions

Tác giả: Vasthi López, Ricardo Alarcón, María S. Orellana, Paula Enríquez, Elena Uribe, José Martínez and Nelson Carvajal

Lĩnh vực: Bioquímica y Biología Molecular

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc tìm hiểu sự tương tác giữa enzyme arginase II của người với các ion cơ chất và mangan thông qua các nghiên cứu đột biến định hướng vị trí và động học. Các đột biến His120Asn, His145Asn và Asn149Asp đã được giới thiệu để đánh giá ảnh hưởng của chúng đến hoạt tính enzyme và ái lực với ion kim loại. Kết quả cho thấy đột biến Asn149Asp đã làm thay đổi đáng kể đặc tính nhận biết cơ chất của arginase II, dẫn đến hoạt tính gần như không thể phát hiện trên arginine nhưng lại có hoạt tính đáng kể trên agmatine. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng Mn2+ là ion kim loại liên kết chặt chẽ hơn với arginase II so với arginase I.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results and Discussion
• General properties of the wild-type, His120Asn, His145Asn and Asn149Asp variants of arginase II
• Effects of the His120Asn and His145Asn mutations on the affinity of metal binding to arginase II
• Altered substrate specificity accompanying the Asn149Asp mutation
• General conclusions
• Experimental procedures
• Materials
• Enzyme preparations
• Site-directed mutagenesis
• Fluorescence spectra and thermal inactivation studies
• Atomic absorption analysis
• Enzyme assays and kinetic studies
• Acknowledgements
• References