Báo cáo khoa học: In vitro and in vivo self-cleavage of Streptococcus pneumoniae signal peptidase I

In Vitro And In Vivo Self-Cleavage Of Streptococcus Pneumoniae Signal Peptidase I

Tác giả: Feng Zheng, Eddie L. Angleton, Jin Lu and Sheng-Bin Peng

Lĩnh vực: Infectious Diseases Research, Lilly Research Laboratories, Indianapolis, IN, USA

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá cơ chế tự phân cắt (self-cleavage) của enzyme Signal Peptidase I (SPase I) từ vi khuẩn Streptococcus pneumoniae. Kết quả cho thấy phospholipid có khả năng kích thích mạnh mẽ quá trình tự phân cắt này, làm tăng hoạt động lên 25 lần. Khi tự phân cắt, SPase I bị bất hoạt, mất khả năng cắt các protein nền. Quan trọng hơn, nghiên cứu đã chứng minh lần đầu tiên quá trình tự phân cắt này diễn ra cả in vivo trong tất cả các giai đoạn sinh trưởng của tế bào vi khuẩn. Tế bào duy trì mức SPase I hoạt động cao nhất trong giai đoạn tăng trưởng theo cấp số nhân, cho thấy tự phân cắt có thể đóng vai trò quan trọng trong việc điều hòa hoạt động của enzyme dưới các điều kiện khác nhau.

Mục lục chi tiết:

• In vitro and in vivo self-cleavage of Streptococcus pneumoniae signal peptidase I
• Keywords: Streptococcus pneumoniae; signal peptidase I; self-cleavage; inactivation; regulation.
• MATERIALS AND METHODS
• Materials and bacterial strains
• Purification of S. pneumoniae SPase I
• Purification of truncated SPase37-204 from self-cleaved SPase I
• Overexpression and purification of truncated S. pneumoniae SPase37-204
• In vitro self-cleavage of S. pneumoniae SPase I
• N-Terminal peptide sequencing
• Cleavage of prestreptokinase by S. pneumoniae SPase I and SPase37-204
• Cleavage of a peptide substrate by S. pneumoniae SPase I and SPase37-204
• Preparation of a polyclonal antibody against S. pneumoniae SPase I
• Detection of in vivo self-cleavage of S. pneumoniae SPase I by Western blot analysis
• RESULTS
• In vitro self-cleavage of S. pneumoniae SPase I
• Kinetics of SPase I self-cleavage
• Self-cleavage sites of S. pneumoniae SPase I resemble signal peptide cleavage sites
• Purification of truncated S. pneumoniae SPase37-204 from self-cleaved products and overexpressed E. coli cells
• SPase37-204 loses its ability to cleave its native substrate, prestreptokinase
• SPase37-204 loses its ability to cleave a peptide substrate
• In vivo self-cleavage of S. pneumoniae SPase I
• S. pneumoniae cells maintain the full length SPase I in the highest level in exponential growth phase
• DISCUSSION
• REFERENCES