Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 225 KB

Giới thiệu nội dung

Biotinylation in the hyperthermophile Aquifex aeolicus: Isolation of a cross-linked BPL:BCCP complex

Tác giả: David J. Clarke, Joseph Coulson, Ranald Baillie and Dominic J. Campopiano

Lĩnh vực: Hóa học, Đại học Edinburgh, Vương quốc Anh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào quá trình biotin hóa protein, một sửa đổi sau dịch mã quan trọng, được xúc tác bởi enzyme Biotin Protein Ligase (BPL) trên protein mang carboxyl biotin (BCCP). Các nhà nghiên cứu đã cô lập và biểu hiện tái tổ hợp BPL và miền biotinyl của BCCP (BCCPA67) từ vi khuẩn siêu ưa nhiệt Aquifex aeolicus. Thử nghiệm in vitro cho thấy BPL xúc tác quá trình biotin hóa trên lysine 117 của BCCPA67 ở nhiệt độ lên tới 70°C. Việc sử dụng hóa chất liên kết ngang đã cho phép cô lập phức hợp BPL:apo-BCCPA67. Kết quả nghiên cứu cung cấp bằng chứng về vai trò của nhóm giả định biotin trong việc giảm khả năng tương tác giữa BCCPA67 và BPL, nhấn mạnh mạng lưới tương tác giữa các protein này trong việc nhận diện protein.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu
  • Thủ tục thực nghiệm
  • Thao tác axit nucleic
  • Nhân bản, biểu hiện và tinh sạch BPL, BCCPA67 và BCCPA67 K117L từ A. aeolicus
  • Biểu hiện và tinh sạch BPL của A. aeolicus
  • Biểu hiện và tinh sạch apo-BCCPA67 và BCCPA67 K117L từ A. aeolicus
  • Đặc tính khối phổ của protein
  • Thử nghiệm BPL của A. aeolicus
  • Phân tích động học của BPL
  • Phân tích động học trạng thái ổn định của sự gắn kết cơ chất BPL
  • Phân tích proteolysis giới hạn của BPL
  • Liên kết hóa học ngang của BPL và BCCP của A. aeolicus
  • Kết quả
  • Phân tích bộ gen của A. aeolicus
  • Tác giả và Cộng tác viên
  • Tài liệu tham khảo