Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 306 KB

Giới thiệu nội dung

Identification and Characterization of Novel Salivary Thrombin Inhibitors from the Ixodidae Tick, Haemaphysalis longicornis

Tác giả: Shiroh Iwanaga, Masakazu Okada, Haruhiko Isawa, Akihiro Morita, Masao Yuda, and Yasuo Chinzei
Lĩnh vực: Hóa sinh, Y học
Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc xác định và đặc tính hóa hai phân tử kháng đông mới, được đặt tên là madanin 1 và 2, từ ve ký sinh Haemaphysalis longicornis. Các phân tử này, có kích thước 7 kDa, không cho thấy sự tương đồng đáng kể với bất kỳ protein nào đã được xác định trước đó. Thử nghiệm trên huyết tương người cho thấy madanin 1 và 2 làm kéo dài thời gian thromboplastin từng phần hoạt hóa (APTT) và thời gian prothrombin (PT) một cách phụ thuộc vào liều lượng, cho thấy khả năng ức chế cả hai con đường nội tại và ngoại sinh của quá trình đông máu. Phân tích bằng cộng hưởng plasmon bề mặt (SPR) đã chứng minh rằng madanin 1 và 2 tương tác đặc hiệu với thrombin. Các thử nghiệm tiếp theo cho thấy madanin 1 và 2 ức chế sự chuyển đổi fibrinogen thành fibrin bởi thrombin, sự hoạt hóa yếu tố V và yếu tố VIII do thrombin xúc tác, và sự kết tụ tiểu cầu do thrombin gây ra, mà không ảnh hưởng đến hoạt tính amidolytic của thrombin. Kết quả này gợi ý rằng madanin 1 và 2 là các chất ức chế cạnh tranh hướng đến vùng gắn anion exosite 1 của thrombin, đóng vai trò quan trọng trong việc ức chế quá trình đông máu của vật chủ, hỗ trợ cho việc hút máu của ve.
Mục lục chi tiết:

  • Experimental Procedures
  • Materials
  • Mass sequence analysis of cDNA clones
  • Expression and purification of recombinant proteins
  • Assay of effects of madanin 1 and 2 on plasma coagulation
  • Binding analysis using surface plasmon resonance (SPR)
  • Assay of effects of madanin 1 and 2 on fibrinogenolytic activity of thrombin
  • Assay of effects of madanin 1 and 2 on activation of factor V and factor VIII by thrombin
  • Assay of effects of madanin 1 and 2 on thrombin-induced platelet aggregation
  • Results
  • cDNA cloning and expression of madanin 1 and 2
  • Madanin 1 and 2 are novel anticoagulants of H. longicornis
  • Thrombin is a target molecule of madanin 1 and 2
  • Madanin 1 and 2 inhibit the conversion of fibrinogen into fibrin by thrombin
  • Madanin 1 and 2 inhibit activation of factors V and VIII and aggregation of platelets by thrombin
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • References