Báo cáo khoa học: Identification and characterization of an R-Smad ortholog (SmSmad1B) from Schistosoma mansoni

Identification and characterization of an R-Smad ortholog (SmSmad1B) from Schistosoma mansoni

Tác giả: Joelle M. Carlo, Ahmed Osman, Edward G. Niles, Wenjie Wu, Marcelo R. Fantappie, Francisco M. B. Oliveira, and Philip T. LoVerde

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Di truyền học, Miễn dịch học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc phân lập và đặc tính hóa một gen R-Smad mới từ ký sinh trùng Schistosoma mansoni, được đặt tên là SmSmad1B. Protein SmSmad1B bao gồm 380 axit amin và có các miền MH1 và MH2 được bảo tồn. Gen SmSmad1B được biểu hiện ở tất cả các giai đoạn phát triển của ký sinh trùng, với mức biểu hiện cao nhất ở giai đoạn cercaria. Các thí nghiệm miễn dịch hóa mô cho thấy protein SmSmad1B có mặt trong các tế bào của nhu mô sán lá gan trưởng thành cũng như trong các mô sinh sản của con cái. Các thử nghiệm tương tác protein, bao gồm cả phương pháp hai và ba loại lai men, cho thấy SmSmad1B tương tác với Co-Smad SmSmad4, nhưng tương tác này bị suy giảm khi có sự hiện diện của thụ thể SmTβRI. Dữ liệu này gợi ý vai trò của SmSmad1B trong các quá trình sinh học quan trọng của Schistosoma mansoni, đặc biệt là sự phát triển sinh sản.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Identification of SmSmad1B
• Phylogenetic analysis
• SmSmad1B gene structure and 5′ upstream analysis
• Developmental expression of SmSmad1B
• Identification and immunolocalization of SmSmad1B protein in adult schistosomes
• SmSmad1B protein interactions
• Yeast two-hybrid and three-hybrid assays
• In vitro interaction assays
• Discussion
• Experimental procedures
• Isolation of SmSmad1B cDNA
• Sequence analysis and phylogenetic tree construction
• Plasmid construction
• Isolation of SmSmad1B BAC clones and gene analysis
• Quantitative RT-PCR
• Production of SmSmad1B-specific antiserum and western blot
• Immunofluoresence assay
• SmSmad1B protein interactions
• Acknowledgements
• References
• Supplementary material