Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 242 KB

Giới thiệu nội dung

His374 of Wheat Endoxylanase Inhibitor TAXI-I Stabilizes Complex Formation with Glycoside Hydrolase Family 11 Endoxylanases

Tác giả: Katleen Fierens, Ann Gils, Stefaan Sansen, Kristof Brijs, Christophe M. Courtin, Paul J. Declerck, Camiel J. De Ranter, Kurt Gebruers, Anja Rabijns, Johan Robben, Steven Van Campenhout, Guido Volckaert, and Jan A. Delcour

Lĩnh vực: Sinh hóa, Khoa học thực phẩm, Công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của His374 trong protein ức chế endoxylanase TAXI-I của lúa mì trong việc ổn định phức hợp với endoxylanase thuộc họ glycoside hydrolase 11. Thông qua các thí nghiệm biến đổi gen và phân tích cộng hưởng plasmon bề mặt (SPR), các nhà nghiên cứu đã xác định rằng His374 là một dư lượng quan trọng trong việc ổn định phức hợp enzyme-chất ức chế, chứ không phải là yếu tố chính trong quá trình gắn kết ban đầu. Các đột biến tại vị trí His374 đã làm giảm đáng kể khả năng ức chế, chủ yếu do tăng hằng số phân ly, cho thấy sự ổn định của phức hợp bị ảnh hưởng nghiêm trọng.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Từ khóa
  • Thư tín
  • Tóm tắt
  • Nội dung tài liệu (Wheat endoxylanase inhibitor TAXI-I inhibits microbial glycoside hydrolase family 11 endoxylanases…)
  • Endoxylanases (EC 3.2.1.8) are key plant or microbial enzymes…
  • Vai trò của TAXI-I His374 trong ức chế endoxylanase
  • Phân tích đột biến của TAXI-I
  • Kết quả và Thảo luận
  • Biểu hiện tái tổ hợp, tinh chế và đặc tính hóa của các chủng đột biến TAXI [H374A/K/Q]
  • Hoạt tính ức chế endoxylanase của các chủng đột biến TAXI-I
  • Tương tác thời gian thực của TAXI-I hoang dã và các chủng đột biến TAXI-I His374 với endoxylanase GH11 được nghiên cứu bằng phân tích SPR
  • Các thông số động học của sự gắn kết của TAXI-I và các chủng đột biến của nó với các endoxylanase GH11
  • Phân tích điện di đẳng điện (IEF) các đường cong chuẩn độ để nghiên cứu điện tích giao diện và độ ổn định pH của tương tác enzyme-chất ức chế
  • Kết luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Vật liệu
  • Biến đổi gen có định hướng của TAXI-I His374: xây dựng plasmid và biến nạp P. pastoris
  • Biểu hiện và tinh chế TAXI-I và các chủng đột biến TAXI-I
  • Tinh chế endoxylanase GH11 cho phân tích đường cong chuẩn độ IEF và SPR
  • Xác định nồng độ protein
  • Thử nghiệm ức chế endoxylanase
  • Phổ CD
  • Phân tích cộng hưởng plasmon bề mặt (SPR)
  • Phân tích đường cong chuẩn độ IEF
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo