Highly Site-Selective Stability Increases by Glycosylation of Dihydrofolate Reductase

Highly site-selective stability increases by glycosylation of dihydrofolate reductase

Tác giả: Lai-Hock Tey, E. Joel Loveridge, Richard S. Swanwick, Sabine L. Flitsch, Rudolf K. Allemann

Lĩnh vực: Biochemistry, Glycosylation, Enzyme Stability

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào ảnh hưởng của quá trình glycosyl hóa (glycoyslation) lên độ ổn định của enzyme dihydrofolate reductase (DHFR) từ vi khuẩn Escherichia coli. Các nhà khoa học đã sử dụng kỹ thuật đột biến định hướng để đưa các gốc cysteine vào enzyme, sau đó tiến hành glycosyl hóa tại các vị trí này bằng các phân tử đường khác nhau. Kết quả cho thấy, việc glycosyl hóa tại vị trí D87C có khả năng tăng cường đáng kể độ ổn định nhiệt của enzyme, với mức tăng phụ thuộc vào loại đường được sử dụng. Ngược lại, glycosyl hóa tại các vị trí khác ít ảnh hưởng hoặc thậm chí làm giảm độ ổn định. Điều này gợi ý rằng vị trí gắn kết của chuỗi đường đóng vai trò quan trọng trong việc quyết định hiệu quả ổn định hóa của quá trình glycosyl hóa.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Preparation of glycosylated EcDHFR mutants
• Ligand binding and kinetics of glycosylated EcDHFR
• Stability of glycosylated EcDHFR
• Discussion
• Experimental procedures
• Protein preparation
• CD spectroscopy
• Determination of free energy of unfolding
• Ligand-binding experiments
• Enzyme kinetics
• Acknowledgement
• References
• Supporting information