Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 16 trang
Dung lượng: 863 KB

Giới thiệu nội dung

Heteromer formation of a long-chain prenyl diphosphate synthase from fission yeast Dps1 and budding yeast Coq1

Tác giả: Mei Zhang, Jun Luo, Yuki Ogiyama, Ryoichi Saiki and Makoto Kawamukai

Lĩnh vực: Department of Applied Bioscience and Biotechnology, Faculty of Life and Environmental Science, Shimane University, Japan

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc tìm hiểu cơ chế hình thành dị thể (heteromer) của enzyme tổng hợp prenyl diphosphate chuỗi dài, cụ thể là enzyme Dps1 từ nấm men phân hạch và enzyme Coq1 từ nấm men chồi. Ubiquinone (UQ) là một yếu tố thiết yếu cho hệ thống vận chuyển điện tử và là một chất chống oxy hóa lipid. Độ dài của chuỗi bên isoprenoid của ubiquinone khác nhau giữa các sinh vật sống, được xác định bởi các enzyme polyprenyl diphosphate synthase (poly-PDSs). Các enzyme này được phân loại thành loại đồng thể (homodimer) và dị thể (heterotetramer). Nghiên cứu đã đặc trưng hóa enzyme hexa-PDS (Coq1) của nấm men chồi Saccharomyces cerevisiae để xác định xem nó có cấu trúc dị thể như ở nấm men phân hạch hay không. Kết quả cho thấy Coq1 hoạt động như một enzyme đồng thể hexa-PDS khi biểu hiện trong E. coli, nhưng lại cần kết hợp với Dps1 để tạo thành một phức dị thể có hoạt tính deca-PDS ở nấm men phân hạch. Sự tương tác này đã được chứng minh bằng đồng miễn dịch kết tủa và hình thành phức dị thể tứ phân tử (heterotetramer). Nghiên cứu cung cấp những hiểu biết quan trọng về quá trình tiến hóa của các enzyme PDS từ dạng đồng thể sang dạng dị thể.

Mục lục chi tiết:

  • Results
  • Isolation of COQ1 cDNA
  • Complementation by COQ1 in an E. coli ispB mutant
  • Complementation of a fission yeast dlp1 or dps1 disruptant by COQ1
  • S. cerevisiae Coq1 forms a heteromer with Sc. pombe Dps1 in fission yeast
  • Coq1 cannot bind with Dps1 as a functional enzyme in E. coli
  • Sc. pombe Dps1 cannot interact with Coq1 in S. cerevisiae
  • PDS activity of a Coq1-Dps1 complex
  • Heterotetramer formation of Coq1 and Dps1 in Sc. pombe
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Materials
  • Strains and plasmids
  • Construction of plasmids
  • Expression of COQ1 and dps1 genes in E. coli or yeast strains
  • Purification of Coq1 and Dps1
  • Coimmunoprecipitation of Coq1 and Dps1 proteins
  • Blue Native-PAGE
  • PDS assay and product analysis
  • Ubiquinone extraction and measurement
  • Acknowledgements
  • References