Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 225 KB

Giới thiệu nội dung

Functional analysis of the basic helix-loop-helix transcription factor DEC1 in circadian regulation

Tác giả: Fuyuki Sato, Takeshi Kawamoto, Katsumi Fujimoto, Mitsuhide Noshiro, Kiyomasa K. Honda, Sato Honma, Ken-ichi Honma and Yukio Kato

Lĩnh vực: Sinh hóa, Y sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của yếu tố phiên mã DEC1 trong việc điều hòa nhịp sinh học. DEC1, một protein thuộc nhóm helix-loop-helix cơ bản (bHLH), được biểu hiện theo nhịp điệu trong nhân trên thị giác (SCN), nơi nó có khả năng điều chỉnh nhịp sinh học của động vật có vú bằng cách ức chế bộ promoter được kích hoạt bởi CLOCK/BMAL1. Bài báo trình bày kết quả phân tích cấu trúc của DEC1, xác định các vùng cần thiết cho hoạt động ức chế và tương tác với BMAL1. Đặc biệt, vùng N-terminal chứa miền bHLH và axit amin Arg65 được xác định là quan trọng cho cả tương tác với BMAL1 và khả năng ức chế phiên mã. Nghiên cứu cũng đề cập đến sự tương tác giữa DEC1 và DEC2, cũng như vai trò của chúng trong việc điều hòa nhịp sinh học.

Mục lục chi tiết:

  • Functional analysis of the basic helix-loop-helix transcription factor DEC1 in circadian regulation
  • Interaction with BMAL1
  • Materials and methods
  • Plasmid constructions
  • Luciferase reporter assay
  • Mammalian two-hybrid assay
  • Western blot analysis
  • Electrophoretic mobility shift assay
  • Pull-down assay
  • Results
  • Deletion analysis of DEC1 on its suppressive activity in the presence of CLOCK and BMAL1
  • Involvement of histone deacetylase (HDAC) in DEC1 or DEC2 suppression of CLOCK/BMAL1-induced gene expression
  • The basic region of DEC1 is essential for its suppressive activity
  • Determination of the binding domain of DEC1 to BMAL1
  • Binding of DEC1 mutants to a CACGTG E-box
  • Determination of the region in BMAL1 for binding to DEC1
  • Dominant-negative DEC1 counteracts the suppression of CLOCK/BMAL1-induced transcription in the presence of full-length DEC1
  • Heterodimer formation of DEC1 and DEC2
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • References