Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 187 KB

Giới thiệu nội dung

Expression and Characterization of Soluble Forms of the Extracellular Domains of the β, γ and ε Subunits of the Human Muscle Acetylcholine Receptor

Tác giả: Kalliopi Kostelidou, Nikolaos Trakas, Marios Zouridakis, Kalliopi Bitzopoulou, Alexandros Sotiriadis, Ira Gavra, and Socrates J. Tzartos

Lĩnh vực: Hóa sinh, Miễn dịch học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày việc biểu hiện và đặc tính hóa các dạng hòa tan của các vùng ngoại bào (ECDs) của các tiểu đơn vị β, γ và ε của thụ thể acetylcholine (AChR) ở cơ người. Các protein tái tổ hợp này đã được biểu hiện trong hệ thống nấm men Pichia pastoris và thu được dưới dạng hòa tan, được glycosyl hóa và với lượng đủ. Các kết quả cho thấy các protein được biểu hiện có các đặc điểm cấu trúc gần với trạng thái tự nhiên, làm cho chúng phù hợp làm vật liệu ban đầu cho các nghiên cứu cấu trúc và chẩn đoán bệnh nhược cơ.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Từ khóa
  • Tóm tắt
  • Các tiểu đơn vị ngoại bào hòa tan của AChR
  • Cấu trúc và đặc tính hóa các dạng hòa tan của vùng ngoại bào của các tiểu đơn vị β, γ và ε của thụ thể acetylcholine ở cơ người
  • Biểu hiện và tinh sạch các protein
  • Phân tích sắc ký lọc gel của các polypeptide
  • Phổ CD
  • Phổ CD
  • Sự gắn kết của kháng thể đơn dòng (mAbs) với các ECD thông qua ELISA
  • Sự gắn kết của huyết thanh kháng-β của thỏ với β1-221 tái tổ hợp và AChR ở người
  • Sự gắn kết của kháng thể MG ở người với các ECD tái tổ hợp
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Nuôi cấy vi khuẩn và nấm men, điều kiện nuôi cấy, plasmid và thao tác DNA
  • Nhân dòng bằng PCR
  • Chuyển đổi nấm men và sàng lọc các dòng dương tính bằng dot-blot
  • Biểu hiện quy mô lớn và tinh sạch protein
  • Khử glycosyl hóa trong ống nghiệm
  • Phân tích FPLC của các polypeptide
  • Gắn nhãn phóng xạ các dấu chuẩn protein và α-bungarotoxin
  • Chuẩn bị huyết thanh kháng-(tiểu đơn vị β) của thỏ
  • Phổ CD
  • ELISA
  • Chuẩn bị hạt Sepharose gắn ECD
  • Sử dụng ma trận ECD-Sepharose để gắn kháng thể AChR trong huyết thanh MG
  • RIA cho huyết thanh MG hoặc huyết thanh kháng-(β1-221) của thỏ
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo