Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 189 KB

Giới thiệu nội dung

Effect of valine 106 on structure-function relation of cytosolic human thymidine kinase

Tên đề tài: Effect of valine 106 on structure-function relation of cytosolic human thymidine kinase

Tác giả: Hanne Frederiksen, Dvora Berenstein, Birgitte Munch-Petersen

Lĩnh vực: Khoa học Đời sống và Hóa học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc tìm hiểu ảnh hưởng của axit amin thứ 106 (vị trí V106) lên tính chất động học và cấu trúc bậc bốn của enzyme thymidine kinase 1 (TK1) ở người. Các nhà nghiên cứu đã tạo ra chín dạng đột biến của TK1 tại vị trí này và phân tích sự thay đổi về hoạt tính xúc tác và khả năng kết tụ của enzyme. Kết quả cho thấy rằng kích thước và hình dạng của axit amin tại vị trí 106 quan trọng hơn độ phân cực đối với hoạt tính và sự kết tụ của TK1. Đặc biệt, các đột biến được chia thành hai nhóm dựa trên kiểu kết tụ và động học thymidine. Nhóm I (bao gồm V106A, V106I, V106T) hoạt động tương tự TK1 dạng tự nhiên (V106WT), với sự chuyển đổi từ dạng dimer có hoạt tính thấp sang dạng tetramer có hoạt tính cao khi có mặt ATP. Ngược lại, nhóm II (bao gồm V106G, V106H, V106K, V106L, V106Q) hoạt động như dạng V106M, duy trì trạng thái tetramer có hoạt tính cao bất kể sự hiện diện của ATP. Nghiên cứu cũng xác nhận vai trò của axit amin 106 và các axit amin lân cận trong quá trình chuyển đổi dimer-tetramer.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Materials and methods
  • Bacterial strains and plasmids
  • Construction of pGEX-2T-LyTK1Val106x mutants
  • Construction of pGEX-2T-LYTK166-136(Val106)
  • Construction of pGEX-2T-LYTK166–136(Met106)
  • DNA sequencing
  • Expression and purification of rLy-TK1 recombinant enzymes and rLy-TK166–136 proteins
  • ATP incubation and storage of the rLy-TK1 recombinant enzymes for kinetic experiments and gel filtration
  • Estimation of subunit molecular size of rLy-TK166–136 by tricine/ethylene glycol/SDS/PAGE
  • Native molecular size
  • Thymidine kinase assay
  • Enzyme kinetics
  • Results
  • Subunit and native molecular size
  • Kinetic properties
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • References