Báo cáo khoa học: Effect of mutations K97A and E128A on RNA binding and self assembly of papaya mosaic potexvirus coat protein

Effect of Mutations K97A and E128A on RNA Binding and Self Assembly of Papaya Mosaic Potexvirus Coat Protein

Tác giả: Marie-Hélène Tremblay, Nathalie Majeau, Marie-Eve Laliberté Gagné, Katia Lecours, Hélène Morin, Jean-Baptiste Duvignaud, Marilène Bolduc, Nicolas Chouinard, Christine Paré, Stéphane Gagné, Denis Leclerc

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Vi sinh vật học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc tìm hiểu vai trò của các đột biến K97A và E128A trong miền liên kết RNA của protein vỏ (CP) virus khảm đu đủ (PapMV) đối với khả năng liên kết RNA và tự lắp ráp thành các hạt giống nucleocapsid (NLPs). Các nhà khoa học đã biểu hiện protein vỏ của PapMV, bao gồm cả các dạng đột biến, trong vi khuẩn E. coli. Kết quả cho thấy protein vỏ có thể tự lắp ráp thành các hạt giống nucleocapsid. Đặc biệt, đột biến K97A đã làm mất khả năng liên kết RNA và tự lắp ráp, trong khi đột biến E128A lại tăng cường ái lực với RNA và khả năng tự lắp ráp hiệu quả hơn, tạo ra các NLPs dài hơn và bền vững hơn.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Kết quả
• Căn chỉnh các protein vỏ của potexvirus
• Biểu hiện và tinh sạch các protein tái tổ hợp của PapMV CP và các dạng đột biến của nó trong E. coli
• Tự lắp ráp của các protein tái tổ hợp đã được tinh sạch
• Nhận diện miễn dịch bằng vàng của các NLPs CPAN5
• Đo quang phổ CD của các protein tái tổ hợp
• Lọc gel của các đĩa CPDN5 và K97A
• Lắp ráp in vitro của đĩa CPDN5
• Đo đạc hàm lượng RNA bằng quang phổ
• Thử nghiệm dịch chuyển gel
• Đo quang phổ CD trong điều kiện biến tính
• Xử lý trypsin các đĩa và NLPs
• Thảo luận
• Quy trình thực nghiệm
• Nhân bản gen PapMV CP
• Biểu hiện và tinh sạch các protein tái tổ hợp từ E. coli
• Kỹ thuật hiển vi điện tử và nhận diện miễn dịch bằng vàng
• SDS/PAGE và nhuộm điện di
• Đo quang phổ CD
• Bản sao RNA và EMSA
• Tinh sạch PapMV và phân lập đĩa
• Xử lý trypsin
• Lời cảm ơn
• Tài liệu tham khảo