Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 255 KB

Giới thiệu nội dung

Dematin Interacts with the Ras-Guanine Nucleotide Exchange Factor Ras-GRF2 and Modulates Mitogen-Activated Protein Kinase Pathways

Tác giả: Mohini Lutchman, Anthony C. Kim, Li Cheng, Ian P. Whitehead, S. Steven Oh, Manjit Hanspal, Andrey A. Boukharov, Toshihiko Hanada, Athar H. Chishti

Lĩnh vực: Sinh hóa, Tế bào học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá sự tương tác giữa protein khung xương erythroid dematin và yếu tố trao đổi nucleotide guanine Ras-GRF2. Dematin, một thành phần chính của phức hợp nối tế bào hồng cầu, có khả năng liên kết và bó sợi actin theo cách phụ thuộc vào phosphorylation. Nghiên cứu đã xác định Ras-GRF2 là một protein tương tác với dematin thông qua phương pháp lai ghép hai giống nấm men. Sự tương tác này đã được xác nhận bằng các kỹ thuật khác như blot overlay và cộng hưởng plasmon bề mặt. Kết quả cho thấy dematin có thể điều hòa hoạt động của các con đường tín hiệu MAP kinase như ERK và JNK thông qua Ras-GRF2. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng dematin có thể liên kết các protein tín hiệu Ras với bộ xương actin, cung cấp một cơ chế mới để điều chỉnh hoạt động của các GTPase nhỏ trong tế bào động vật có vú.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Quy trình thực nghiệm
    • Sàng lọc hai giống nấm men
    • Lai ghép nấm men
    • Nhân dòng Ras-GRF2 cDNA và các cấu trúc biểu hiện
    • Phân tích biểu hiện
    • Thử nghiệm blot overlay
    • Phân tích cộng hưởng plasmon bề mặt
    • Chuyển nhiễm Ras-GRF2 và dematin vào tế bào NIH 3T3
    • Miễn dịch tế bào
    • Hoạt hóa ERK1
    • Cấu trúc phân tử
    • Thử nghiệm báo cáo gen biểu hiện tạm thời
    • Thử nghiệm hoạt hóa Rac1
  • Kết quả
    • Phân lập Ras-GRF2 người bằng sàng lọc hai giống nấm men
    • Nhân dòng và cấu trúc sơ cấp hoàn chỉnh của Ras-GRF2 người
    • Ras-GRF2 người được phân bố rộng rãi nhưng biểu hiện phong phú nhất ở não
    • Độ đặc hiệu của tương tác liên kết giữa dematin và Ras-GRF2 người
    • Dematin và Ras-GRF2 liên kết trong dịch não chuột và trong các tế bào biểu mô được chuyển nhiễm
    • Ras-GRF2 và dematin cùng định vị trong các nguyên bào sợi được chuyển nhiễm
    • Tác động của biểu hiện dematin lên hoạt hóa ERK1 và JNK
    • Dematin không điều hòa hoạt tính Rac-GRF do Ras-GRF2 mã hóa
    • Dematin ngăn chặn sự hoạt hóa Jun do Ras-GRF2
  • Thảo luận