CHUYỂN GEN gfp (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN Pseudomonas fluorescens BẰNG PHƯƠNG PHÁP TIẾP HỢP BA THÀNH PHẦN

Chuyển gen gfp (Green Fluorescent Protein) vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần

Tác giả: Đỗ Thị Ngọc Hân

Lĩnh vực: Công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu:
Đề tài nghiên cứu tập trung vào việc chuyển gen gfp (Green Fluorescent Protein) vào tế bào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần. Nghiên cứu nhằm mục đích chọn lọc các chủng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens có khả năng đối kháng nấm và định cư trên rễ cây cà chua. Quy trình tiếp hợp ba thành phần được thiết lập để chuyển gen gfp, đồng thời tiến hành ly trích DNA plasmid và DNA tổng số làm mẫu dò và mẫu lai. Phương pháp Dot Blot được áp dụng để kiểm tra sự hiện diện của gen gfp đã chuyển. Cuối cùng, vi khuẩn biến đổi gen sẽ được quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang để đánh giá biểu hiện gen.

Mục lục chi tiết:

• Lời cảm ơn
• Tóm tắt
• Mục lục
• Danh sách các chữ viết tắt
• Danh sách các hình
• Danh sách các bảng
• Phần 1. Mở đầu
• Đặt vấn đề
• Mục tiêu đề tài
• Đối tượng nghiên cứu
• Nội dung thực hiện
• Phần 2. Tổng quan tài liệu
• Sự di chuyển gen và tái tổ hợp gen ở vi khuẩn
• Hiện tượng biến nạp (Transfomation)
• Định nghĩa
• Cơ chế hiện tượng biến nạp
• Hiện tượng tải nạp (Transduction)
• Định nghĩa
• Cơ chế hiện tượng tải nạp
• Hiện tượng tiếp hợp ở vi khuẩn (Conjugation)
• Định nghĩa
• Thí nghiệm Lederberg và Tatum (1946)
• Yếu tố giới tính F
• Các loại vi khuẩn đực mang yếu tố F
• Vách tế bào của vi khuẩn
• Cấu tạo vách tế bào Gram (+)
• Cấu tạo vách tế bào Gram (-)
• Vi khuẩn – tác nhân phòng trừ sinh học
• Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens
• Phân loại vi khuẩn Pseudomonas fluorescens
• Các nghiên cứu về vi khuẩn Pseudomonas fluorescens
• Plasmid
• Transposon
• Transposon vi khuẩn
• Phân loại transposon
• Cơ chế chuyển vị
• Ứng dụng của transposon
• Protein GFP
• Cấu trúc và đặc điểm
• Tình hình nghiên cứu về gen gfp
• Phương pháp đánh dấu
• Phương pháp nick – translation
• Phương pháp random priming
• Phương pháp đánh dấu End labelling
• Phương pháp photobiotin
• Lai phân tử
• Khái niệm về lai phân tử
• Các yếu tố ảnh hưởng đến sự lai phân tử
• Các kiểu lai phân tử
• Phần 3. Vật liệu và phương pháp
• Thời gian và địa điểm thực hiện khóa luận
• Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
• Vật liệu thí nghiệm
• Vi khuẩn E.coli DH5a (λ-pir) chứa plasmid pUT-gfp
• Vi khuẩn E.coli DH5a (λ-pir) chứa plasmid pRK600
• Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens
• Các thiết bị, dụng cụ thường sử dụng
• Phương pháp nghiên cứu
• Phương pháp triparental mating tiếp hợp đoạn gen gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens
• Ly trích genomic DNA từ các dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens đã tiếp hợp
• Phương pháp Dot Blot
• Chuyển DNA lên màng
• Phương pháp ly trích DNA plasmid sử dụng SDS kiềm
• Thực hiện đánh dấu đoạn DNA plasmid pUT-gfp
• Thực hiện phản ứng lai
• Phát hiện kết quả trên phim X – ray
• Quan sát vi khuẩn trên kính hiển vi
• Phần 4. Kết quả và thảo luận
• Kết quả
• Kết quả tiếp hợp đoạn gen gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens
• Nuôi cấy vi khuẩn trong môi trường LB
• Nuôi cấy vi khuẩn trên môi trường KB
• Nuôi cấy vi khuẩn trên môi trường M9
• Kết quả làm đối chứng
• Kết quả ly trích genomic DNA từ các dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescens đã tiếp hợp
• Kết quả thực hiện phản ứng lai
• Kết quả xem trên kính hiển vi phát huỳnh quang Olympus BX51
• Thảo luận
• Phần 5. Kết luận và đề nghị
• Kết luận
• Đề nghị
• Tài liệu tham khảo
• Phụ lục