Báo cáo khoa học: Characterization of promoter 3 of the human thromboxane A2 receptor gene A functional AP-1 and octamer motif are required for basal promoter activity

Characterization of promoter 3 of the human thromboxane A2 receptor gene

Tác giả: Adrian T. Coyle and B. Therese Kinsella

Lĩnh vực: Biochemistry, Conway Institute of Biomolecular and Biomedical Research, University College Dublin, Belfield, Dublin, Ireland

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định các yếu tố chính điều chỉnh biểu hiện của TPβ thông qua việc phân tích chức năng của promoter 3 (Prm3), xác định vùng promoter cốt lõi và các yếu tố điều hòa cis. Nghiên cứu đã xác định rằng các nucleotide từ -118 đến +1 là cần thiết cho hoạt động của Prm3. Ba vùng điều hòa đã được xác định: một vùng ức chế ở thượng nguồn (-404 đến -320) và hai vùng điều hòa dương cần thiết cho biểu hiện gen cơ bản hiệu quả (-154 đến -106 và -50 đến +1). Phân tích chi tiết các yếu tố phiên mã đã tiết lộ vai trò quan trọng của các yếu tố Oct-1/2 và activator protein-1 (AP-1) trong việc điều hòa hoạt động cơ bản của Prm3. Đặc biệt, yếu tố AP-1 đóng vai trò trung gian cho sự tăng cường hoạt động của Prm3 bởi phorbol myristic acid (PMA), cung cấp một lời giải thích cơ chế cho sự điều hòa tăng cường mRNA TPβ bởi phorbol ester.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Functional analysis of promoter 3 of the human TXA2 receptor (TP) gene
• Identification of a functional Oct-1/2 element within promoter 3
• Identification of a functional AP-1 element within promoter 3
• Examination of the coordinate regulation of promoter 3 basal activity by the AP-1 and Oct-1/2 transcription factors
• Investigation of the role of the AP-1 site at -27 in phorbol myristic acid (PMA) induction of promoter 3
• Discussion
• Experimental procedures
• Materials
• Construction of luciferase-based genetic reporter plasmids
• Site-directed mutagenesis
• Cell culture
• Assay of luciferase activity
• Preparation of nuclear extracts
• Electrophoretic mobility shift and supershift assays
• Western blot analysis
• Statistical analysis
• Acknowledgements
• References