Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 13 trang
Dung lượng: 252 KB

Giới thiệu nội dung

Calcium-binding to lens βB2- and βA3-crystallins suggests that all β-crystallins are calcium-binding proteins

Tác giả: Maroor K. Jobby and Yogendra Sharma

Lĩnh vực: Centre for Cellular and Molecular Biology (CCMB), Hyderabad, India

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khảo sát khả năng liên kết canxi của hai loại protein β-crystallin chính là βB2 và βA3, vốn là những protein cấu trúc quan trọng trong thủy tinh thể của động vật có vú. Bằng cách sử dụng nhiều phương pháp phân tích khác nhau, bao gồm các kỹ thuật liên kết canxi trực tiếp và sử dụng các đầu dò mô phỏng canxi, các nhà nghiên cứu đã chứng minh rằng cả βB2 và βA3-crystallin đều có khả năng liên kết canxi với ái lực vừa phải. Điều quan trọng là, quá trình liên kết canxi này không làm thay đổi cấu trúc bậc ba hay độ ổn định của protein. Kết quả nghiên cứu này, cùng với các bằng chứng trước đây về các thành viên khác của siêu họ βγ-crystallin, cho thấy rằng tất cả các β-crystallin đều có khả năng liên kết canxi. Phát hiện này có ý nghĩa quan trọng trong việc hiểu rõ hơn về vai trò của β-crystallin trong việc duy trì cân bằng nội môi ion và trong cơ chế sinh bệnh đục thủy tinh thể.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Crystallins are the major proteins of a mammalian eye lens…
  • Results and Discussion
  • Selection of β-crystallins
  • Overexpression and purification
  • Calcium-binding to βB2- and βA3-crystallins
  • Probing calcium-binding by Stains-All assay
  • Probing calcium-binding by terbium
  • Calcium-binding by 45Ca overlay method
  • Calcium-binding by isothermal titration calorimetry
  • Trp fluorescence emission spectra
  • Effect of calcium on protein conformation
  • Far- and near-UV CD spectroscopy
  • 2D NMR spectroscopy
  • Putative calcium-binding sites
  • All β-crystallins are calcium-binding proteins
  • Implications of calcium-binding to crystallins in cataract a noncrystallin function
  • Experimental procedures
  • Materials
  • Cloning and overexpression
  • Purification
  • Stains-All binding assay
  • Terbium binding
  • 45Ca overlay assay
  • Fluorescence spectroscopy
  • CD spectroscopy
  • Isothermal titration calorimetry
  • NMR spectroscopy
  • Acknowledgements
  • References
  • Supplementary material