Báo cáo “Tinh sạch và xác định tính chất của phytase tái tổ hợp “

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc tinh sạch và xác định các tính chất của enzyme phytase tái tổ hợp, có nguồn gốc từ vi khuẩn Bacillus subtilis B1, sau khi được biểu hiện thành công trong E. coli BL21. Phytase đóng vai trò quan trọng trong việc thủy phân phytate, một dạng dự trữ phosphorus chính trong thực vật, giúp nâng cao hiệu quả hấp thụ phosphorus và giảm ô nhiễm môi trường do phosphorus. Enzyme tái tổ hợp sau khi tinh sạch bằng cột sắc ký His-tag cho thấy khối lượng phân tử ước tính khoảng 47 kDa. Nghiên cứu đã xác định các điều kiện hoạt động tối ưu của enzyme bao gồm pH 6,5 và nhiệt độ 55°C, với sự hiện diện của 1 mM CaCl₂. Bên cạnh đó, các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính của enzyme cũng đã được khảo sát, cho thấy enzyme bị ức chế mạnh bởi EDTA và ion Cu²⁺, trong khi ion Ca²⁺ giúp tăng độ bền nhiệt. Phytase tái tổ hợp thể hiện sự nhạy cảm với pepsin nhưng lại khá bền với trypsin. Giá trị Km đối với cơ chất sodium phytate được xác định là 0,48 mM và Vmax là 180 µmol/phút.

Mục lục chi tiết:

• TÓM TẮT
• MỞ ĐẦU
• VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
  • Vật liệu
    • Chủng vi sinh vật
    • Plasmid
    • Môi trường
  • Phương pháp nghiên cứu
    • Biểu hiện phytase tái tổ hợp
    • Tinh sạch phytase tái tổ hợp qua cột sắc ký ái lực His-tag
    • Điện di SDS-PAGE
    • Xác định hàm lượng protein
    • Xác định hoạt tính của PhyC tái tổ hợp
    • Xác định tính chất PhyC tái tổ hợp
• KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
  • Tinh sạch enzyme tái tổ hợp
  • Ảnh hưởng của pH đến hoạt độ và độ bền của PhyC tái tổ hợp
  • Ảnh hưởng của nhiệt độ và độ bền nhiệt đến hoạt độ của PhyC tái tổ hợp
  • Ảnh hưởng của các ion kim loại và chất khử đến PhyC tái tổ hợp
• Động học enzyme
• KẾT LUẬN
• Lời cảm ơn
• TÀI LIỆU THAM KHẢO