Báo cáo khoa học: An internal ribosome entry site mediates the initiation of soluble guanylyl cyclase b2 mRNA translation

An Internal Ribosome Entry Site Mediates The Initiation Of Soluble Guanylyl Cyclase ẞ2 Mrna Translation

Tên đề tài: An Internal Ribosome Entry Site Mediates The Initiation Of Soluble Guanylyl Cyclase ẞ2 Mrna Translation

Tác giả: Roberto I. Vazquez-Padron, Si M. Pham, Dania Mateu, Sheik Khan, Abdelouahab Aitouche

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc khám phá cơ chế dịch mã của tiểu đơn vị β2 của guanylyl cyclase hòa tan (sGC). Các nhà nghiên cứu đã xác định hai loại mRNA sGC β2 từ thận người, mỗi loại có vùng không dịch mã 5′ (5′-UTR) khác biệt. Vùng 5′-UTR phong phú nhất của sGC β2 chứa nhiều khung đọc mở (ORF) và cấu trúc thứ cấp ổn định có khả năng ức chế quá trình dịch mã. Nghiên cứu đã chứng minh rằng các vùng 5′-UTR này có hoạt tính của yếu tố khởi đầu dịch mã nội tại (IRES), cho phép dịch mã thông qua một cơ chế thay thế. Mô hình cấu trúc thứ cấp của sGC β2 5′-UTR dự đoán một cấu trúc giả gút hình chữ Y, đặc trưng cho IRES trong mRNA tế bào. Những phát hiện này cho thấy rằng sGC β2 5′-UTRs có hoạt tính IRES, có thể cho phép biểu hiện sGC β2 trong các điều kiện không tối ưu cho dịch mã dựa trên quét.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Results
• Cloning of the sGC ẞ2 5′-UTRs
• The sGC ẞ2 5′-UTR contains numerous uAUGs and stable predictable secondary structures
• The sGC ẞ2 5′-UTR inhibits in vitro translation of a downstream reporter gene
• The sGC ẞ2 5′-UTR inhibits in vivo transcription and translation of a downstream reporter gene
• The 5′-UTR of SCG ẞ2 mRNA harbors an IRES
• IRES activity in the 5′-UTR of sGC ẞ2 mRNA is neither due to the presence of a cryptic promoter nor to splicing sites in the bicistronic mRNA
• The alternative sGC ẞ2 5′-UTR promotes the IRES-mediated translation
• The sGC ẞ2 IRES is functional in a wide range of cell lines
• Discussion
• Experimental procedures
• Cloning of 5′-UTRs of the human sGC ẞ2 gene
• Genetic constructs
• Cell culture and transient transfection
• Luciferase activity
• Northern blot, RT-PCR, and TaqMan real time RT-PCR
• In vitro transcription and translation
• Secondary structure modeling
• Acknowledgements
• References
• Supplementary material