Báo cáo khoa học: Adenylyl cyclase Rv0386 from Mycobacterium tuberculosis H37Rv uses a novel mode for substrate selection

Adenylyl cyclase Rv0386 from Mycobacterium tuberculosis H37Rv uses a novel mode for substrate selection

Tác giả: Lucila I. Castro, Corinna Hermsen, Joachim E. Schultz and Jürgen U. Linder

Lĩnh vực: Abteilung Pharmazeutische Biochemie, Fakultät für Chemie und Pharmazie, Universität Tübingen, Germany

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào adenylyl cyclase (AC) Rv0386 từ chủng vi khuẩn gây bệnh lao Mycobacterium tuberculosis H37Rv. Khác với các AC loại III thông thường, Rv0386 sở hữu một miền xúc tác khác biệt, thay thế các axit amin quy định tính đặc hiệu với ATP bằng cặp glutamine-asparagine. Miền xúc tác của Rv0386 thể hiện hoạt tính AC với tốc độ 8 nmol cAMP mg⁻¹·min⁻¹ và một hoạt tính phụ guanylyl cyclase (GC) đáng chú ý với GTP. Phân tích đột biến chỉ ra rằng cặp glutamine-asparagine này là yếu tố then chốt cho hoạt động xúc tác, cho thấy một cơ chế lựa chọn cơ chất mới lạ. Nghiên cứu đề xuất một mô hình tương tác với purine dựa trên sự “chuyển đổi amide”, tương tự như cơ chế đã được xác định ở phosphodiesterase nucleotide vòng.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Results
• Sequence analysis
• AC activity of the Rv0386 CHD
• Mutational analysis of Rv0386(1-175)
• Enzymatic activity of the Rv0386 holoenzyme
• Discussion
• Proposed mode of purine binding
• Experimental procedures
• Materials
• Plasmid Construction
• Expression and purification of proteins
• Cyclase assays
• Western blot analysis
• Sequence analyses
• Acknowledgements
• References