Báo cáo khoa học: Activated Rac1, but not the tumorigenic variant Rac1b, is ubiquitinated on Lys 147 through a JNK-regulated process

Activated Rac1, but not the tumorigenic variant Rac1b, is ubiquitinated on Lys 147 through a JNK-regulated process

Tác giả: Orane Visvikis, Patrick Lorès, Laurent Boyer, Pierre Chardin, Emmanuel Lemichez, and Gérard Gacon

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Tế bào

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá cơ chế điều hòa các dạng hoạt động của Rho GTPases, đặc biệt tập trung vào protein Rac1. Kết quả cho thấy dạng biến thể ung thư Rac1b ít bị ubiquitination và chống lại sự phân giải protein bởi hệ thống ubiquitin-proteasome hơn dạng Rac1L61. Lysine 147 (Lys147) được xác định là vị trí chính cho quá trình ubiquitination của Rac1 hoạt động, một vị trí có thể truy cập được bởi dung môi và có cấu trúc tương tự ở cả Rac1L61 và Rac1b. Quan trọng hơn, quá trình ubiquitination của Rac1 được điều hòa bởi enzyme JNK. Sự thiếu hụt ubiquitination ở Rac1b có thể là do khả năng hoạt hóa JNK bị suy giảm của nó, dẫn đến sự ổn định cao hơn và có thể góp phần vào khả năng gây ung thư của nó. Nghiên cứu này gợi ý một cơ chế điều hòa mới cho phép tế bào kiểm soát sự hoạt động quá mức của Rac1 GTPase, đồng thời làm sáng tỏ vai trò của Rac1b trong sự phát triển ung thư.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Rac1b is much less sensitive than Rac1L61 to the UPS
• The main target site for Rac1 ubiquitination is Lys147, a surface residue not hampered in Rac1b
• Rac1 ubiquitination is dependent on JNK activation
• Discussion
• Experimental procedures
• Cell culture, reagents and transfection
• DNA plasmids and mutagenesis
• Antibodies
• Western blotting
• Immunofluorescence
• Activated Rac1 GTPase pulldown assay
• Ubiquitination assay
• Assay for proteasomal degradation
• Acknowledgements
• References
• Supplementary material