Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 170 KB

Giới thiệu nội dung

A Novel Plant Protein Disulfide Isomerase Family Homologous to Animal P5 – Molecular Cloning and Characterization as a Functional Protein for Folding of Soybean Seed-Storage Proteins

Tác giả: Hiroyuki Wadahama, Shinya Kamauchi, Yumi Nakamoto, Keito Nishizawa, Masao Ishimoto, Teruo Kawada, Reiko Urade

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc phân lập và đặc tính hóa một gen protein disulfide isomerase (PDI) mới từ đậu tương, được đặt tên là GmPDIM. Gen này mã hóa một protein có cấu trúc tương tự protein P5 của động vật. GmPDIM tái tổ hợp cho thấy hoạt tính oxy hóa phục hồi trên RNase A biến tính, gợi ý vai trò trong việc gấp nếp protein. Phân tích trình tự bộ gen cho thấy cấu trúc exon/intron tương đồng với các loài thực vật khác. Đặc biệt, GmPDIM thể hiện sự biểu hiện tăng lên trong điều kiện căng thẳng ER và được định vị trong lumen ER. Dữ liệu cho thấy GmPDIM tương tác với proglycinin và chuỗi alpha của beta-conglycinin, là các tiền chất của protein lưu trữ hạt giống đậu tương. Kết quả này gợi ý rằng GmPDIM có thể đóng vai trò quan trọng trong quá trình gấp nếp protein lưu trữ hạt giống đậu tương, hoạt động không chỉ như một thiol-oxidoreductase mà còn như một phân tử chaperone.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả
  • Phân lập cDNA của GmPDIM
  • Biểu hiện của GmPDIM trong các mô đậu tương
  • GmPDIM là một protein lumen ER
  • Tương tác của GmPDIM với proglycinin và chuỗi alpha của beta-conglycinin trong lá mầm
  • Thảo luận
  • Thủ tục thực nghiệm
  • Thực vật
  • Phân lập cDNA của GmPDIM
  • Phân lập chuỗi bộ gen của GmPDIM
  • Xây dựng plasmid biểu hiện His-tagged
  • Biểu hiện và tinh sạch GmPDIM tái tổ hợp
  • Phân giải protein giới hạn của GmPDIM
  • Thử nghiệm oxy hóa phục hồi với RNase A khử
  • Kháng thể
  • Phân tích western immunoblot
  • Phân tích RT-PCR thời gian thực
  • Phân vùng ER
  • Xử lý proteinase K đối với microsome
  • Thí nghiệm miễn dịch kết tủa
  • Tài liệu tham khảo
  • Tài liệu bổ sung