Báo cáo Y học: A new high affinity binding site for suppressor of cytokine signaling-3 on the erythropoietin receptor

A New High Affinity Binding Site for Suppressor of Cytokine Signaling-3 on the Erythropoietin Receptor

Tác giả: Michael Hörtner, Ulrich Nielsch, Lorenz M. Mayr, Peter C. Heinrich, Serge Haan

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá một vị trí liên kết ái lực cao mới cho protein ức chế tín hiệu cytokine-3 (SOCS-3) trên thụ thể erythropoietin (EpoR). Các nhà nghiên cứu đã xác định rằng motif kép phosphorylation pY429pY431 trên EpoR liên kết với SOCS-3 với ái lực cao hơn đáng kể so với motif pY401 đã được báo cáo trước đó. Các phương pháp như cộng hưởng plasmon bề mặt (SPR), phân tích kết tủa peptide và mô hình hóa phân tử đã được sử dụng để xác nhận phát hiện này và làm sáng tỏ cơ chế phân tử của sự tương tác. Kết quả cho thấy sự đồng phosphoryl hóa của hai gốc tyrosine gần kề đóng vai trò quan trọng trong việc tăng cường ái lực liên kết của SOCS-3.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Cloning of human SOCS-3
• Generation of SOCS-3 mutants
• Expression of SOCS-3 in bacteria and eukaryotic cells
• Biosensor analysis
• Peptide precipitation assay and immunoblot analysis
• Molecular modeling of the human SOCS-3 SH2 Domain
• Results
• SOCS-3 binds to the phosphotyrosine motifs pY343, pY401 and pY429pY431 of the EPO-receptor
• SOCS-3 binds with higher affinity to pY429 pY431 than to pY401
• SOCS-3 needs a double phosphorylated Y429Y431 motif for highest affinity binding
• SOCS-3 specifically binds to the receptor motifs encompassing tyrosines pY401 and pY429pY431 in COS7 cells
• Model structure of the human SOCS-3 SH2 domain
• Discussion
• Acknowledgements
• References