Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 319 KB

Giới thiệu nội dung

The Saccharomyces cerevisiae type 2A protein phosphatase Pph22p is biochemically different from mammalian PP2A

Tác giả: Piotr Zabrocki, Wojciech Swiatek, Ewa Sugajska, Johan M. Thevelein, Stefaan Wera, Stanislaw Zolnierowicz

Lĩnh vực: Sinh hóa, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc đặc trưng hóa protein phosphatase 2A loại 2A (PP2A) từ nấm men Saccharomyces cerevisiae, có tên là Pph22p, và so sánh các đặc tính sinh hóa của nó với PP2A từ động vật có vú. Pph22p có một phần mở rộng N-terminal độc đáo khoảng 70 amino acid mà PP2A ở động vật có vú, thực vật và Schizosaccharomyces pombe không có. Các nhà nghiên cứu đã biểu hiện quá mức Pph22p và một dạng đột biến thiếu phần N-terminal (AN-Pph22p) trong Pichia pastoris, sau đó tinh sạch các enzyme này. So sánh các đặc tính sinh hóa của Pph22p và AN-Pph22p với PP2A của con người đã cho thấy cả điểm tương đồng và khác biệt. Trong khi cả hai enzyme đều thể hiện hoạt tính tương tự đối với phosphorylase a và bị ảnh hưởng bởi các chất ức chế và ion kim loại theo cùng một cách, Pph22p (nhưng không phải AN-Pph22p) lại tương tác mạnh mẽ với protamine, tương tự như dạng dimer của PP2A ở động vật có vú. Điều này cho thấy phần mở rộng N-terminal của Pph22p có vai trò điều hòa, ảnh hưởng đến tương tác với protamine, polylysine và có thể cả phospholipid.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Tài liệu và phương pháp
  • Khuôn khổ biểu hiện của các cấu trúc biểu hiện Pph22p
  • Tái tổ hợp đồng nhất trong các chủng KM71 và GS115 của Pichia pastoris
  • Biểu hiện quy mô nhỏ của Pph22p và AN-Pph22p trong P. pastoris
  • Biểu hiện quy mô trung bình của các protein tái tổ hợp trong P. pastoris
  • Tinh sạch Pph22p và AN-Pph22p tái tổ hợp
  • Kháng thể và miễn dịch phát hiện
  • Các xét nghiệm hoạt tính phosphatase
  • Chuẩn bị liposome
  • Xác định ảnh hưởng của disulfide lên PP2Ac tái tổ hợp từ nấm men và động vật có vú
  • Tái hoạt động của PP2Ac và Pph22p
  • So sánh các tiểu đơn vị xúc tác PP2A từ S. cerevisiae và các loài khác
  • Tinh sạch S. cerevisiae Pph22p biểu hiện trong P. pastoris
  • Đặc trưng hóa Pph22p và AN-Pph22p đã tinh sạch
  • Trạng thái oxy hóa khử của Pph22p
  • Kết luận
  • Tài liệu tham khảo